| 研究課題/領域番号 |
15K11247
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
森谷 徳文 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (60467751)
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| 研究分担者 |
青山 絵理子 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (10432650)
滝川 正春 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (20112063)
西田 崇 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (30322233)
松村 達志 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (70432648)
久保田 聡 岡山大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (90221936)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 軟骨再生 |
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| 研究実績の概要 |
これまでの研究でDexamethasoneを軟骨細胞様細胞株であるHCS-2/8細胞に作用させるとCTGF/CCN2がup-regulateされることはすでに明らかにしている．CTGF/CCN2遺伝子の発現を調節する遺伝子を検索したところCEBPBおよびCEBPD遺伝子が候補として挙げられたため，まずはこれら2遺伝子がDexamethasone によりup-regulateされることをreal-time PCR法にて明らかとした．続いてCEBPB，CEBPD遺伝子をHCS-2/8細胞にtransfectionして強制発現させCTGF/CCN2遺伝子の発現調節を確認したところCTGF/CCN2遺伝子発現の促進を示唆する結果が得られた．またHCS-2/8細胞においてCEBPB，CEBPDの遺伝子発現をRNAiにより抑制したところCTGF/CCN2遺伝子発現の抑制を示唆する結果が得られた．これをタンパク質レベルで確認するため，まずCEBPB，CEBPD遺伝子をHCS-2/8細胞にtransfectionして強制発現させCTGF/CCN2タンパク質の発現調節をWestern Blot法にて確認したところCTGF/CCN2タンパク質発現の促進を示唆する結果が得られた．これによりCEBPB，CEBPDがCTGF/CCN2を直接コントロールしている可能性が示唆された．
一方でCTGF/CCN2の発現をコントロールしている他の因子を検索したところ17個の遺伝子が候補として挙げられた．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
おおむね計画通りに研究が進んだため
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| 今後の研究の推進方策 |
1) CTGF/CCN2の発現をコントロールしていると考えられるCEBPB, CEBPD以外の因子を同定し，これらをCEBPB, CEBPDを含めNCRF(New CTGF/CCN2 related factor)と定義する．
2) HCS-2/8細胞内でのNCRF発現の局在を確認する．
3) Dex刺激に伴うNCRFのタンパク質発現・分布のHCS-2/8細胞における変化をWestern blot法あるいはELISA法を用いて確認する．
4) NCRFの軟骨細胞分化における役割をin vitroで機能解析する．
5) NCRFを介してCTGF/CCN2を特異的に誘導する分子を探索する．
6) 各種OAモデルラットを用いてNCRFまたは5)で見出された分子が軟骨再生機能を有するか否かを検証する．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
実験に使用する一部の消耗品が十分量あり，追加購入の必要性が生じなかったため．
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度に持ち越した予算は，国内での資料収集等に使用する計画である．
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