| 研究課題/領域番号 |
15K11256
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
大山 恵子 九州大学, 大学病院, 助教 (60740719)
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| 研究分担者 |
森山 雅文 九州大学, 歯学研究院, 助教 (20452774)
中村 誠司 九州大学, 歯学研究院, 教授 (60189040)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 唾液 / サイトカイン / フローサイトメトリー法 / DNAマイクロアレイ法 / TLR8 / ELISA法 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、まず SS 患者の口唇腺を用いて、病態発症に関与する分子を SS と類似疾患(薬物性、放射線性口腔乾燥症)患者および健常者(粘液貯留嚢胞)の口唇腺より抽出した RNA を用いて遺伝子発現パターンをクラスタリングで比較し、Gene Ontology アノテ ーションを用いて発現変動遺伝子の機能解析を行う。さらに、発現変動遺伝子をリストアップして、SS 患者の口唇腺におけるそれらの発現と局在を検索する Validationを行う。DNA マイクロアレイ法 にて網羅的に検索した上で、疾患関連分子を同定し、さらに唾液で検出できるかを検証する。対象は SS をはじめ、コントロールとして健常者、そして SS の類似疾患として薬物性、放射線性口腔乾燥症患者の口唇腺および唾液を採取する。検査方法は実用化を考えると、簡便で再現性が保たれていることが必須条件であり、そのため、濃度測定には短時間で数十種類の分子を一度に測定できる CBA flex system (Flow cytometry 法)を用いる。最終的にはその測定結果と臨床所見(唾液量、VAS、画像所見、血清学的所見など)との相関について検討し、重症度分類に応用可能かを検証する。さらに、経時的に測定を行うことにより、これまで困難であった SS の治療評価にも繋がると考えられる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
SS患者の口唇腺を用いて、病態発症の関連分子をDNAマイクロアレイ法にて網羅的に検索したところTLR1、TLR７、TLR８、TLR9、MyD88、IRF1、IRF7、およびIRF8に有意な発現上昇を認めた。症例数を増やしてValidationを行った結果、TLR８のみmRNA発現が有意に亢進していた。さらに唾液で確かめるためにFlow cytometry法を検討したが現在TLRの抗体ビーズが存在しないため、条件設定や解析方法の確立のために延長が必要である。
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| 今後の研究の推進方策 |
SS患者の口唇腺を用いて、病態発症の関連分子をDNAマイクロアレイ法にて網羅的に検索したところ、TLR８のみ発現が有意に亢進していた。しかし、今回用いる予定であったCBAキット（Flow cytometry法）にはTLR8の抗体ビーズが存在しないため、今後はELISA法など他の測定方法での検出を試みている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
SS患者の口唇腺を用いて、病態発症の関連分子をDNAマイクロアレイ法にて網羅的に検索したところ、TLR８のみ発現が有意に亢進していた。しかし、今回用いる予定であったCBAキット（Flow cytometry法）にはTLR8の抗体ビーズが存在しないため、本年度は延長申請し、次年度使用額を使用してELISA法など他の測定方法での検出を試みる予定である。
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