| 研究課題/領域番号 |
15K11261
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| 研究機関 | 京都府立医科大学 |
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研究代表者 |
金村 成智 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70204542)
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| 研究分担者 |
雨宮 傑 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90398389)
山本 俊郎 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (40347472)
本城 賢一 京都府立医科大学, 医学部附属病院, 専攻医 (00756877) [辞退]
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 移植・再生医療 / 再生医学 / 細胞・組織 / 歯学 |
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| 研究実績の概要 |
羊膜上での骨膜由来細胞の骨分化誘導培養による培養細胞シート作製の最適化、および組織学的検討を行った。羊膜は、帝王切開時の胎盤より採取したもの、および再生医療支援機構・近畿羊膜バンクからの研究用羊膜の譲渡・供給を受け、研究に供した。骨膜組織は智歯（親知らず）の抜歯術や歯周病患者における歯周外科手術時の粘膜骨膜弁作製時に、歯槽骨上にある組織を骨膜組織として採取した。得られた骨膜片を直ちに抗菌薬を添加したPBS（-）にて洗浄後、初代細胞を得るための培養を行った。培養液として感染症フリーの10％のウシ胎仔血清（FBS）および抗菌薬を添加した標準的な細胞培養液を用いた。3～4継代培養後、得られた骨膜由来細胞を羊膜上に播種・培養し、羊膜上にて骨膜由来細胞の骨分化誘導培養を行い、新規骨分化誘導培養骨膜由来細胞シート作製のための最適化を行った。われわれは、すでに骨膜由来細胞を羊膜上にて培養する手法を確立しており、この細胞培養系に改良を加え骨膜由来細胞の骨分化誘導培養に応用した。骨膜由来細胞の骨分化誘導培養には、感染症 (-) の10%FBSおよび抗菌薬を添加した標準的な細胞培養液に、アスコルビン酸、β-グリセロリン酸、デキサメタゾンを添加したものを用いた。上記にて得られた培養細胞シートに対して組織学的検討検討を行ったところ、骨膜由来細胞は羊膜上にて増殖し、層状をなした培養細胞シートの作製が可能であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
われわれが確立した羊膜上での細胞培養系を用いて、骨膜由来細胞の骨分化誘導培養を行った結果、羊膜上にて骨膜由来細胞は増殖し、層状構造をなす結果が得られており、研究は概ね順調に進展していると判断される。
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| 今後の研究の推進方策 |
骨膜由来細胞の羊膜上における細胞増殖能および細胞間接着装置の検索、ならびに培養細胞-基質（羊膜）間の接着（基底膜）についての検索を行う。また、骨膜には骨芽細胞や骨細胞へ分化する能力をもつ細胞が含まれているとされる。細胞シートにおいても、骨芽細胞が産生する骨タンパクについても検討を加える。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
年度内に実験材料の調達が間に合わず、予定額を下回った。
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| 次年度使用額の使用計画 |
実験材料の購入ならびに免疫染色に使用する抗体の購入、研究成果発表のための旅費・投稿費として使用する予定である。
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