| 研究課題/領域番号 |
15K11332
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
高岡 一樹 兵庫医科大学, 医学部, 講師 (60373122)
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| 研究分担者 |
浦出 雅裕 兵庫医科大学, 医学部, 特別招聘教授 (70104883)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 骨簿小環境 / 破骨前駆細胞 / TGF-β |
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| 研究実績の概要 |
マクロファージ系破骨前駆細胞RAW264.7細胞を，TGF-β1，SB431542およびRANKLによって24時間および72時間処理し，Proliferation assay，TRAP solution assay，Migration assay， Western Blot，Adhesion assay，Immunofluorescenceを行い比較検討した．
【結果】1. TGF-β1，RANKL作用群は細胞増殖が抑制され，SB431542を作用させることにより増殖抑制は回復した．2. TGF-β1作用による破骨細胞への分化は認められなかったが，RANKL作用により分化を認めた．TGF-β1+RANKL作用群が最も分化傾向が高く，SB431542作用により分化は抑制された．3. 24時間作用後では，TGF-β1作用群は対照群より運動能が有意に亢進し，SB431542作用群で運動能は低下した．72時間作用後では，TGF-β1作用群は対照群より運動能が有意に低下し，SB431542作用群で運動能が亢進した．4. 24時間作用後では，対照群と比較しTGF-β1作用群のRhoA，Rac1，Cdc42のタンパク発現が上昇した．72時間作用後では，対照群と比較しTGF-β1，RANKL作用群のRhoA，特にRac1，Cdc42のタンパク発現が減少した．5. 24時間作用後では，TGF-β1作用群は対照群と比較して接着能が有意に低下していた．その傾向はRAKLを併用作用させても同様であった．72時間作用させると，TGF-β1作用群の接着能の低下は回復傾向を示した．SB431542作用により接着能が回復した．6. 細胞運動が亢進していたTGF-β1，TGF-β1＋RANKL24時間作用群は細胞突起を多くもつ細胞形態に変化し，細胞突起部にvinculinの発現がみられた．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
蛍光免疫染色で細胞質全体に発現がみられることが多く，評価が困難な状態であったが，それ以外は順調に進展している．
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| 今後の研究の推進方策 |
蛍光免疫染色の抗体を変えて，再度，施行して，評価を行う予定である．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
RAW細胞を新たに購入して，研究を継続する予定であったが，今回は，凍結保存していた細胞を使用した．
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| 次年度使用額の使用計画 |
RAW細胞は継代を繰り返すと，老化し分化しなくなるため，次年度の追加実験は，RAW細胞を購入して行う予定である．
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