| 研究課題/領域番号 |
15K11352
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
川上 正良 奈良県立医科大学, 医学部, 学内講師 (20244717)
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| 研究分担者 |
和中 明生 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (90210989)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 発生・分化 / 細胞・組織 / 遺伝子 / シグナル伝達 / 歯学 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、形態形成を司るWntシグナルについて顎顔面の形成時におけるメカニズムを明らかにすることを目的としている。
平成27年度は、Wntシグナル阻害による細胞増殖活性の変化を調べた。BrdUを投与し免疫組織学的染色を行って、Beads周辺のBrdU陽性細胞数を測定した。DKK-1投与後24時間、48時間で、DKK-1投与群のBrdU陽性細胞の発現割合が有意に減少し、細胞増殖能が減少した。また、Beads埋入6時間後のembryoの上顎突起からreal-time RT-PCRを行ったところ、形態発生に関与するBmp4、Tbx22、Sox9、Barx1遺伝子発現が有意に減少した。
平成28年度は、上記のDKK-1によるWntシグナル阻害を検証するために、DKK-1投与1時間後、Wntシグナルの細胞内伝達物質beta-cateninの分解阻害剤Alsterpaulloneを投与して上記のWntシグナル阻害が回復するかどうか調べた。その結果Bmp4、Tbx22、Sox9の発現が回復したことから、WntシグナルはBmp4、Tbx22、Sox9、Barx1遺伝子発現に影響を与えていることを確認した。
平成29年度は、Wntシグナルの顎顔面形成への影響を調べるために、chick embryoの上顎突起にAlsterpaulloneを投与し、Wnt シグナルをupregulateした。Real-timeRT-PCRの結果、Msx1遺伝子発現が1.5倍に増加していることが明らかとなった。Msx1遺伝子は顎顔面の形成を司る主要な因子であり、Alsterpaulloneによって発現増加したことから、WntシグナルはMsx1遺伝子を介して顎顔面の発生・形成に関与していることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成29年度研究計画の内、Wntシグナルによる顎顔面形成への効果を検証するため、Alsterpaulloneを投与し、Wnt シグナルをupregulateし、さまざまな遺伝子発現を測定した（研究結果は前述）。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成29年度が研究計画の最終年度にあたるため、まだ結果の出ていない実験を完成させるため期間を延長する。
具体的には：Wntシグナルをup-regulateするAlsterpaullone をembryoの上顎突起に投与し、BrdUによる細胞増殖能やcleaved caspase-3を用いたapoptosisの発現について調べる。また、形態形成への影響を調べるため、stage 38（投与後12日目；顔面骨格が完成する時期）のembryoを摘出・固定後、Alcian BlueとAlizarin Redの染色を行い顔面骨格および骨形成の状態を観察する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
[理由]まだ結果の出ていない実験が残っており、論文にまとめられていないため。
[使用計画]残りの実験を遂行するとともに論文完成をめざす。
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