| 研究課題/領域番号 |
15K11401
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| 研究機関 | 松本歯科大学 |
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研究代表者 |
小出 雅則 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (10367617)
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| 研究分担者 |
二宮 禎 松本歯科大学, 総合歯科医学研究所, 講師 (00360222)
宇田川 信之 松本歯科大学, 歯学部, 教授 (70245801)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 歯学 / 再生医学 / 細胞・組織 |
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| 研究実績の概要 |
歯周病により喪失した歯槽骨の回復は非常に困難である。近年、エナメルマトリックス蛋白やFGF-2などの歯周組織再生薬が開発されている。しかし、歯槽骨形成を直接促進する薬の開発は十分でない。最近、receptor activator of nuclear factor kappa-B (RANK) 様ペプチドは骨吸収抑制のみならず、骨形成作用を持つことが示された。また、我々は骨吸収が亢進した破骨細胞分化抑制因子 (osteoprotegerin, OPG) 遺伝子欠損マウスが自然発症型の歯槽骨吸収モデルであることを見出した。本研究の目的は、我々が確立した歯槽骨吸収モデルにRANK様ペプチドを投与して、歯槽骨の再生効果とその作用機序を明らかにすることである。(1)歯槽骨吸収モデルへのRANK様ペプチド投与実験を行った。RANK様ペプチドは、3回/日の5日間の皮下投与で、皮質骨の骨形成を促進することが示されている。A) 歯槽骨吸収を呈する12週齢のOPG遺伝子欠損マウスにRANK様ペプチドを3回/日の5日間皮下投与した。B) 投与前後のマウス歯槽骨をマイクロCTで撮影して、ヒトと同様にセメントエナメル境から歯槽骨頂までの距離を歯槽骨吸収量として測定した。C) 歯槽骨および大腿骨の骨量を測定した。これらの評価より、RANK様ペプチドによる歯槽骨の骨量増加効果を評価している。これらの成果より、RANK様ペプチドが歯槽骨吸収を改善するかどうかを明らかにする。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
計画書の計画に沿って実験を行えている。実験検体の解析も計画的に遂行出来ているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
RANK様ペプチドを投与した歯槽骨吸収モデルの生化学および組織学的解析を行う。RANK様ペプチドは、骨吸収抑制と骨形成促進を介して歯槽骨を再生すると想定されるため、両因子の評価を行う。全身への作用は血清を解析して、歯槽骨は免疫組織化学的に解析する。A) 血清中の骨吸収マーカーであるTRAP5bと骨形成マーカーであるALP量を測定する。B) 歯槽骨の破骨細胞の数や分布の変化を解析するため、破骨細胞マーカーであるTRAPやカテプシンＫ染色を行う。骨吸収能を評価するため、骨表面で破骨細胞が占める割合を測定する。C) 歯槽骨の骨芽細胞の数や分布の変化を解析するため、ALPやオステオカルシン染色を行う。骨形成能を評価するため、カルセイン2重ラベル間の距離を測定して、骨形成速度を解析する。D) 全身への作用として、免疫組織化学的に大腿骨の破骨細胞数と骨吸収能を測定する。大腿骨の骨芽細胞数と骨形成速度を測定する。歯槽骨と全身へのペプチドの作用を解析する。これらの評価より、RANK様ペプチドによる骨吸収抑制と骨形成促進作用を明らかにする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遺伝子改変マウスの交配が予定より遅れたため、実験計画の一部が次年度になった。また、研究試薬の代金の一部を次年度の予算としたためである。
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| 次年度使用額の使用計画 |
研究計画通りに実験を行い、次年度使用金額を平成28年度分の予算と合わせて計画的に使用する。
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