重症心不全に対する遺伝子治療法をめざした抗体核酸複合体の開発

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K12542
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 松崎 高志 大阪大学, 医学系研究科, 特任助教 (90456939)
• 研究分担者: 眞鍋 史乃 国立研究開発法人理化学研究所, 主任研究員研究室等, 専任研究員 (60300901) ; 富 海英 大阪大学, 医学系研究科, 特任助教 (70754646)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 抗体核酸複合体 / 心不全 / siRNA

研究実績の概要

今年度はsiRNAのエンドソーム脱出を促進するため、カテプシンの基質ペプチドおよびpH依存的膜融合ペプチドからなるポリペプチドリンカーを用いたHB-EGF抗体核酸複合体を開発した。In vitro評価により、細胞内へ侵入した本ベクターの約50%が内在性のカテプシンにより切断され、エンドソームへのsiRNAの蓄積が軽減することが明らかとなった。更に、コントロールの非切断型および非膜融合型のHB-EGF抗体核酸複合体と比較し、有意に高い遺伝子ノックダウン効率を示すことも明らかとなった。以上の結果から、アビジン/ビオチン結合を介さず、二価架橋剤とポリペプチドリンカーを用い、細胞質へ高効率にsiRNAをデリバリー可能な画期的なHB-EGF抗体核酸複合体の開発に成功した。
HB-EGF抗体核酸複合体の不全心での標的細胞を同定するため、近赤外共焦点レーザー顕微鏡を用いて組織学的解析を行った。その結果、HB-EGF抗体核酸複合体は心筋細胞マーカーであるトロポニンTとマージせず、線維芽細胞マーカーであるI型コラーゲンと一部マージすることが明らかとなった。次にセルソーター（FACS）を用い、不全心より線維芽細胞をソーティングにより分取し、HB-EGFの発現量を定量的PCRにより測定した。その結果、線維芽細胞ではHB-EGFが高発現していることが明らかとなった。以上の結果から、HB-EGF抗体核酸複合体の不全心での標的細胞は線維芽細胞である可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Development of a novel one-step production system for injectable liposomes under GMP. (2017)
  • 著者名/発表者名: Araki R, Matsuzaki T, Nakamura A, Nakatani D, Sanada S, Fu HY, Okuda K, Yamato M, Tsuchida S, Sakata Y, Minamino T.
  • 雑誌名: Pharmaceutical Development and Technology 巻: - ページ: 1-6
  • DOI: 10.1080/10837450.2017.1290106.
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] RNA Aptamer Binds Heparin-Binding Epidermal Growth Factor-Like Growth Factor with High Affinity and Specificity and Neutralizes Its Activity (2017)
  • 著者名/発表者名: Masaki Yamato, Takashi Matsuzaki, Ryo Araki, Shota Tsuchida, Keiji Okuda, Hai Ying Fu, Shoji Sanada, Hiroshi Asanuma, Yoshihiro Asano, Masanori Asakura, Hiroomi Torii, Kentaro Noi, Hirotsugu Ogi, Ryo Iwamoto, Eisuke Mekada, Seiji Takashima, Yasushi Sakata,
  • 雑誌名: International Journal of Gerontology 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Chemical Endoplasmic Reticulum Chaperone Alleviates Doxorubicin-Induced Cardiac Dysfunction. (2016)
  • 著者名/発表者名: Fu HY, Sanada S, Matsuzaki T, Liao Y, Okuda K, Yamato M, Tsuchida S, Araki R, Asano Y, Asanuma H, Asakura M, French BA, Sakata Y, Kitakaze M, Minamino T.
  • 雑誌名: Circulation Research 巻: 118 ページ: 798-809
  • DOI: 10.1161/CIRCRESAHA.115.307604. Epub 2016 Feb 1.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted Therapy for Acute Autoimmune Myocarditis with Nano-Sized Liposomal FK506 in Rats. (2016)
  • 著者名/発表者名: Okuda K, Fu HY, Matsuzaki T, Araki R, Tsuchida S, Thanikachalam PV, Fukuta T, Asai T, Yamato M, Sanada S, Asanuma H, Asano Y, Asakura M, Hanawa H, Hao H, Oku N, Takashima S, Kitakaze M, Sakata Y, Minamino T.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 11 ページ: -
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0160944. eCollection 2016.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] HB-EGF抗体を用いた動脈硬化巣への核酸デリバリーシステムの開発 (2016)
  • 著者名/発表者名: 松崎高志、土田翔太、富海英、奥田啓二、山戸昌樹、荒木亮、南野哲男
  • 学会等名: 第32回日本DDS学会学術集会
  • 発表場所: グランシップ（静岡県コンベンションアーツセンター）
  • 年月日: 2016-06-30 – 2016-07-01
• [学会発表] リポソーム化免疫抑制剤による心筋炎治療 (2016)
  • 著者名/発表者名: 奥田啓二、松崎高志、富海英、土田翔太、荒木亮、山戸昌樹、福田達也、浅井智浩、奥直人、南野哲男
  • 学会等名: 第32回日本DDS学会学術集会
  • 発表場所: グランシップ（静岡県コンベンションアーツセンター）
  • 年月日: 2016-06-30 – 2016-07-01
• [学会発表] ＤＤＳを用いた急性心筋梗塞治療薬の開発 (2016)
  • 著者名/発表者名: 南野哲男、松崎高志、中谷大作、荒木亮
  • 学会等名: 第32回日本DDS学会学術集会
  • 発表場所: グランシップ（静岡県コンベンションアーツセンター）
  • 年月日: 2016-06-30 – 2016-07-01
  • 招待講演
• [学会発表] ドラッグデリバリーシステムを用いた急性心筋梗塞治療薬の開発 (2016)
  • 著者名/発表者名: 南野哲男、松崎高志、中谷大作、荒木亮
  • 学会等名: 日本薬剤学会第31年会
  • 発表場所: 長良川国際会議場
  • 年月日: 2016-05-19 – 2016-05-21
  • 国際学会 / 招待講演