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本研究では、分析対象の細胞膜レセプターを細胞表層及び細胞内部でドナー及びアクセプターとなる蛍光色素でラベル化し、細胞膜を介した共鳴エネルギー移動（FRET）を利用したレセプター間の相互作用解析系の構築を試みた。具体的には、分析対象のレセプターを細胞表層においてテルビウム錯体でラベル化し、細胞内ではGFPを利用してラベル化した。この系ではドナー及びアクセプターとなる蛍光団同士の立体障害を回避することができるため、レセプター間の相互作用を従来の系よりも生理条件下に近い環境で観察することができるものと考え研究を進めた。
初年度は、レセプターとしてブラジキニンB2レセプター（B2R）を選び、テルビウム錯体からGFPへの細胞表層でのFRETを利用したレセプターの相互作用解析系を構築し、最適な蛍光測定条件の検討を行った。今年度（最終年度）は、まずB2RのN末端とC末端にそれぞれBCCPとGFPを連結した融合タンパク質（BCCP-B2R-GFP）を利用して解析を行い、細胞膜を介したFRET分析が可能であるかどうか評価した。実際に、この融合タンパク質を発現させた細胞に、テルビウム錯体で修飾したBPL（Tb-BPL）を作用させた後にFRETシグナルを評価したところ、コントロールとして比較して有意に大きなFRETシグナルを観察することに成功した。そこで次に、細胞膜を介したエネルギー移動を利用して、B2Rの会合挙動の解析を試みた。ここではBCCP-B2Rと共に、B2RのC末端にGFPを連結した融合タンパク質（B2R-GFP）を動物細胞に発現させ、その後、Tb-BPLを作用させてテルビウム錯体によるラベル化を行った。ラベル化後、テルビウム錯体からGFPへのFRETシグナルをモニターしたところ、B2Rの会合を示唆するデータを得ることできた。
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