研究課題/領域番号 |
15K14352
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研究機関 | 長崎大学 |
研究代表者 |
森 望 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(医学系), 教授 (00130394)
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研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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キーワード | 神経細胞 / ニューロン / 老化 / 加齢 / 酸化ストレス / 蛋白質凝集ストレス / DNA損傷 / 神経保護 |
研究実績の概要 |
マウスの脳内でのNRSF発現レベルについて、若齢、中齢、老齢について比較した結果、老化脳での発現が高くなることを確認できた。ついで、マウス胎児脳海馬からの初代培養神経の長期培養系で、若齢期と老齢期での比較をしたところ、老齢ニューロンでの発現強化が確認できた。 次いで、培養神経細胞にNRSF遺伝子導入したものとしていないものについて、酸化ストレス(H2O2)負荷後の細胞の生存率を比較した。その結果、NRSFを導入した細胞群ではストレス耐性が高いことがわかった。また、初代培養神経細胞への遺伝子導入とは別に、ニューロンのモデル細胞系であるNeuro2a細胞にドキシサイクリン(DOX)でNRSFを誘導できる系を樹立し、この細胞を使って、酸化ストレス(H2O2)と蛋白質凝集ストレス(MG132)の効果を比較検討した。ここでは特にDNA損傷をg-H2AX fociの数として定量的に比較した。DOXでの誘導細胞と非誘導細胞とで比較すると、DOX誘導によるNRSF発現誘導細胞では、DNA損傷が低下することがわかった。ただし、30分の誘導でははっきりとした効果があるが、2時間の誘導では細胞の生存へのダメージが観察された。つまり、短時間処理ではNRSFは細胞保護効果があるが、長時間誘導では逆に細胞死を誘発するらしい。したがって、NRSFの発現レベルによって、あるいは発現後の蛋白質修飾の状況によって、結果が異なるように思われた。今後、それぞれの時点でのNRSFの化学的実体、他の蛋白質との共存状態などを注意深く観察していく必要があると考えられた。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
米国のGail MandelのグループからNRSFによる神経幹細胞のゲノム安定性維持への寄与が指摘されたことをうけて、実験系に神経細胞のDNA損傷レベルを測定することを追加した。また、Neuro2a細胞への遺伝子導入系だけでなく、事前に組み込んだNRSF遺伝子のDOXによる誘導系も確立した上で実験を進めており、そのため時間を要した。
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今後の研究の推進方策 |
平成29年度への一年延長を認めていただいたので、他の補強実験を追加して論文のとりまとめを努力する。
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次年度使用額が生じた理由 |
研究の進行が若干遅れたことと、次年度での確定研究費がなかったため、多少なりとも研究資金を残しておく必要があった。
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次年度使用額の使用計画 |
残りの研究を遂行するための実験消耗品、成果発表のための旅費、論文のとりまとめのための経費、として使用する予定。
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