任意の遺伝子を発現する細胞を分取する新技術の開発

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K14361
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 依馬 正次 滋賀医科大学, 動物生命科学研究センター, 教授 (60359578)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 胚性幹細胞 / 多能性幹細胞

研究実績の概要

１）研究項目1：SmartFlareを用いた未分化な多能性幹細胞における標識条件の最適化
未分化なマウスES細胞のGapdh mRNAを可視化するための最適条件を見出すことを目標として実験を行った。具体的には、Gapdh mRNAに対するSmartFlareオリゴを、マウスES細胞の培養液に添加し、培養し、経時観察したところ、コントロール mRNAに対するSmartFlareオリゴを添加した群と比較して、有意にシグナルが強い濃度を見出すことが出来た。

２）研究項目２： SmartFlareを用いた多能性幹細胞の亜集団の解析
先行研究から、未分化なマウス多能性幹細胞にはRex1、Stella、CD31が不均一に発現し、それらの遺伝子が発現している画分のみが、キメラ貢献能を示す事が判明している。そこで、（１）の研究から見出された最適条件下で、マウスESあるいはiPS細胞をRex1 mRNA SmartFlareとコントロール mRNAに対するSmartFlareオリゴと培養し、Rex1陽性画分をソートし、Rex1陽性画分を得ることが出来た。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

１）研究項目1：SmartFlareを用いた未分化な多能性幹細胞における標識条件の最適化
既に、Gapdh mRNAに対するSmartFlareオリゴを、マウスES細胞の培養液に添加し、培養し、経時観察したところ、コントロール mRNAに対するSmartFlareオリゴを添加した群と比較して、有意にシグナルが強い濃度を見出すことが出来たため。
２）研究項目２： SmartFlareを用いた多能性幹細胞の亜集団の解析
（１）の研究から見出された最適条件下で、マウスESあるいはiPS細胞をRex1 mRNA SmartFlareとコントロール mRNAに対するSmartFlareオリゴと培養し、Rex1陽性画分をソートし、Rex1陽性画分を得ることが出来たため。

以上の点から、おおむね順調に進展していると考えられる。

今後の研究の推進方策

２）研究項目２： SmartFlareを用いた多能性幹細胞の亜集団の解析
今後、Rex1陽性画分をソートし、マウス胚盤胞に移入し、１３日胚で解剖し、キメラ率（生殖隆起への貢献能も評価）を評価することで、先行研究に一致した結果が得られているかどうか評価する。

研究成果

• [雑誌論文] Functional compensation between Myc and PI3K signaling supports self-renewal of embryonic stem cells. (2015)
  • 著者名/発表者名: Hishida T, Nakachi Y, Mizuno Y, Katano M, Okazaki Y, Ema M, Takahashi S, Hirasaki M, Suzuki A, Ueda A, Nishimoto M, Hishida-Nozaki Y, Vazquez-Ferrer E, Sancho-Martinez I, Izpisua Belmonte JC, Okuda A.
  • 雑誌名: Stem Cells. 巻: 33 ページ: 713-725
  • DOI: 10.1002/stem.1893.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Forced expression of Nanog or Esrrb preserves the ESC status in the absence of nucleostemin expression. (2015)
  • 著者名/発表者名: Katano M, Ema M, Nakachi Y, Mizuno Y, Hirasaki M, Suzuki A, Ueda A, Nishimoto M, Takahashi S, Okazaki Y, Okuda A.
  • 雑誌名: Stem Cells. 巻: 33 ページ: 1089-1101
  • DOI: 10.1002/stem.1918.
  • 査読あり / 国際共著
• [備考] 研究室ホームページ
  • URL: http://lab.rcals.jp