| 研究課題/領域番号 |
15K14526
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
高橋 淑子 京都大学, 理学(系)研究科(研究院), 教授 (10183857)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 血管リモデリング / ニワトリ胚 / 卵黄動脈 / 遺伝子導入 / 血管内皮細胞 / トランスフェクション |
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| 研究実績の概要 |
生体機能の根幹をなす血管ネットワークの形成過程では、最初ランダムに作られた原始血管網が、血管リモデリングと呼ばれる過程を経て、最終的に明瞭なパターンを獲得する。血管リモデリングには血流刺激が必要なことは古くから知られていたが、そのしくみはほとんどわかっていない。本研究では、血流刺激が血管内皮細胞に及ぼす影響を解析し、それがいかにして巨視的な血管リモデリングというダイナミックな形態変化を引き起こすのかを解明することを最終目標と定め、そのために必要な新規実験系を確立することを目的とする。
本年度は、ニワトリ胚卵黄動脈のリモデリングを解析系として確立し、リモデリング過程における血管内皮細胞の挙動を解析するための遺伝子導入法の開発を試みた。GFP遺伝子などで血管内皮細胞を特異的に操作できれば、内皮細胞の挙動を高解像度で解析出来るからである。マウスやゼブラフィッシュでは、血管内皮細胞の遺伝子操作は可能ではあるが、これらの場合、すべての内皮細胞がGFPで標識されるため、細胞挙動の詳細な解析は困難であるなどの問題があった。ニワトリ胚卵黄動脈は２次元平面状でリモデリングが進むことから、これらの問題を克服できると考えて、血管内にモザイク状に遺伝子導入することを試みた。さまざまな遺伝子導入試薬を試すと共に、導入するDNAプラスミド濃度なの最適化を行い、内皮細胞のモザイク遺伝子操作にほぼ成功した。これらの成果により、内皮細胞ライブイメージング解析などの基盤が整備された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
卵黄動脈への遺伝子導入法の検討については、計画どおりのプロセスで正しいことがわかったが、解析の途中でニワトリ胚の発生の調子が安定せず、同じ条件の胚を用いた条件検討に当初よりも時間がかかった。養鶏場における天候不順や若雌鶏などが原因である可能性が考えられた。
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| 今後の研究の推進方策 |
ニワトリ胚卵黄動脈前駆体への遺伝子導入法がほぼ最適化できたので、今後はGFP遺伝子を導入された血管内皮細胞の挙動をライブイメージング解析法などを用いて調べる予定である。すでに、血流との相関を示す興味深い予備的データもで始めており、当初の予定どおり研究を進めたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
解析の途中でニワトリ胚の発生の調子が安定せず、同じ条件の胚を用いた条件検討に当初の予定よりも時間がかかったため、当初予定していたライブイメージングに係る費用が未使用となった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
ニワトリ胚卵黄動脈前駆体への遺伝子導入法がほぼ最適化できたので、今後はGFP遺伝子を導入された血管内皮細胞の挙動をライブイメージング解析法などを用いて調べる予定である。次年度使用額は、これらの解析にあてる。
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