| 研究課題/領域番号 |
15K14552
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
武宮 淳史 九州大学, 大学院理学研究院, 助教 (80448406)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | プロテオーム / シグナル伝達 / フォトトロピン / 青色光 |
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| 研究実績の概要 |
フォトトロピンはN末端領域に光受容ドメイン、C末端領域にキナーゼドメインをもつ受容体型キナーゼであり、光受容に伴い基質タンパク質をリン酸化することでシグナル伝達を開始すると考えられる。本研究ではリン酸化ペプチド濃縮技術とショットガンプロテオミクスを融合したリン酸化プロテオーム解析により、フォトトロピンの新規リン酸化基質の同定を目指す。本年度はシロイヌナズナの野生株とフォトトロピン変異体の黄化芽生えを対象とし、青色光に依存してリン酸化されるタンパク質を網羅的に解析した。暗所および青色光照射後3分目の材料からタンパク質を抽出しリン酸化を検出したところ、青色光に依存して再現よくリン酸化レベルが3倍以上に上昇するタンパク質を多数検出することに成功した。つぎにフォトトロピン変異体について同様の解析を行い野生株の結果と比較することで、フォトトロピンに依存したリン酸化とフォトトロピン非依存的なリン酸化を選別した。現在、これらの因子がフォトトロピンにより直接リン酸化される可能性を調べている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
リン酸化プロテオームにより青色光・フォトトロピンに依存してリン酸化されるタンパク質の検出が完了し、基質候補となる可能性のあるタンパク質を多数得ることができたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は同定されたリン酸化タンパク質がフォトトロピンにより直接リン酸化される可能性をin vitroキナーゼアッセイにより調べる。また、当該タンパク質がフォトトロピンと相互作用する可能性についても、in vitro pull-down アッセイやyeast two-hybrid、in vivo共免疫沈降等の手法により検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
キャンパス移転により研究ができない期間が生じたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
リン酸化アッセイや結合実験に用いる消耗品費に使用する。
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