| 研究課題/領域番号 |
15K14649
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| 研究機関 | 静岡大学 |
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研究代表者 |
八幡 昌紀 静岡大学, 農学部, 准教授 (60420353)
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| 研究分担者 |
松山 知樹 国立研究開発法人理化学研究所, その他部局等, 研究員 (30291090)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | イオンビーム / 果樹 / カンキツ / DNAマーカー / 突然変異 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では，地域資源を守り、活用を支える品種内識別や産地判別用のDNAマーク開発を行うために、以下の実験を行った。
材料には、多胚性を示すシキキツ（Citrus madurensis Lour.）の実生を供試し、放射線医学総合研究所・HIMACの炭素イオンビーム(LET 20keV/μm)で、発芽10日前後の実生に0-100Gy（吸収線量）の強度で照射した。その結果、30Gyまでの照射区の実生では、葉の一部に斑入りまたは葉形異常が見られたものの、無処理区と同様の生育を示した。しかし、50Gy以上の照射区では実生の生長停止が認められた。その後、75と100Gy照射区では枯死または生長が停止した状態であったのに対し、50Gy照射区では生長停止後、しばらくしてから、第１節間深部から新たに萌芽が見られた。育成を継続したところ、無処理区の実生と同様に旺盛な生長を示すものと、極小化・矮小化するものが観察された。
次に、照射実生について、既報の改良RAPD法（Shirao et al., Mol Breed. 31: 729-735, 2013）に従いDNA抽出、PCR反応、多型パターン検出を行った。その結果、50Gy照射区の生育が劣る実生からDNA多型が検出された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
実験１の「種子や茎頂等への粒子線（重イオンビーム）照射条件の検討を行い、DNAマーキング技術の確立」（担当：理化学研究所）では、平成27年度の目標である「カンキツの種子と頂芽に重イオンビーム照射を行い、DNAマーク最適条件（強度・線量、サンプルの状態・生育ステージ等）を検討する」に対し、シキキツ実生の茎頂への50Gy照射によりDNA多型が検出され、DNAマーク付与系統の作出に成功した。
実験２の「開発されたDNAマーク付与系統の形態・形質の評価」（担当：静岡大学）では、平成27年度の目標である「照射・DNA多型検出のためのサンプル育成・調整」に対して、発芽10日前後の実生に調整することで、50Gy照射の実生でDNAマーク付与系統が作出され、生育に変化を観察することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
実験１の「種子や茎頂等への粒子線照射条件の検討を行い、DNAマーキング技術の確立」（担当：理化学研究所）では、平成28年度も引き続き、照射条件の設定（高精度化した照射実験系の確立と再現性の確認）と照射個体の多型検出を進める。特に、50Gy付近の照射強度で、照射部位や実生の生育ステージについて検討する。多型が検出された場合は、随時、静大農場にDNAマーク付与体を送る。
実験２の「開発されたDNAマーク付与系統の形態・形質の評価」（担当：静岡大学）では、平成28年度も引き続き、実験材料の調整・提供を行う。また、平成27年度の成果で得られたDNAマーク付与体の育成を行い、それらの形態・形質を調査するとともに、「DNAマーク」が維持されるかどうかを確認していく。
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