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2015 年度 実施状況報告書

「ナノピペット」による蛍光標識したストレス顆粒の単離

研究課題

研究課題/領域番号 15K14707
研究機関筑波大学

研究代表者

金 俊達  筑波大学, 生命環境系, 助教 (90570036)

研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2017-03-31
キーワードストレス顆粒 / ナノピペット
研究実績の概要

「ストレス顆粒」は、ストレス刺激に応答して一過性に形成される細胞質内の構造体であり、この顆粒の形成が細胞のストレス適応機構として重要な役割を担っている。しかし、ストレス顆粒が形質膜を持たないことから生化学的な単離や精製が困難であるため、形成や制御に働く全構成因子らは未だ分かっていない。本研究では、生細胞から、① 蛍光融合タンパク質をプローブ(バイオイメージング)として、② 先端口径が約 50 nmのナノピペット技術(ナノテクノロジー)を組み合わせることで、ストレス顆粒をナノ環境(生細胞)からミクロ環境(チューブ)へ単離・精製することを目的とした。
本年度は、タンパク質アルギニンメチル化酵素 PRMT1の二量体の蛍光シグナルが、ストレス刺激によって形成された細胞内顆粒に局在することが認められた。この結果から、「ストレス顆粒」の場所を特定することが可能になり、ナノピペットを用いた顆粒の単離を進めている。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

細胞内100-200 nmの構造体であるストレス顆粒は、膜構造を持たないことやその形成が動的かつ可逆的であるため、細胞から生化学的実験手法を用いた単離や精製は極めて困難である。本研究では細胞内で形成されるストレス顆粒に局在する蛍光タンパク質をターゲットとしてナノピペットを用いて選択なサンプリング技術の構築を目指す。現在まで、タンパク質アルギニンメチル化酵素であるPRMT1二量体が、酸化ストレスによってストレス顆粒に局在を示すことから、既知のマーカータンパク質と合わせて細胞内ストレス顆粒の正確な場所が特定でき、ナノピペットによる顆粒の単離が可能であると判断する。

今後の研究の推進方策

平成27度の結果を受け、平成28度は、ナノピペットを用いて細胞内で形成されるストレス顆粒の単離と精製を試みる。また、単一細胞から単離後のストレス顆粒を用いて、それらを構成している本質(mRNA・タンパク質・生体低分子)の解析を行い、細胞におけるストレス応答機構とストレス顆粒の役割の解明を目指す。

  • 研究成果

    (6件)

すべて 2016 2015

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (4件)

  • [雑誌論文] Novel helical assembly in arginine methyltransferase 82016

    • 著者名/発表者名
      Toma-Fukai S, Kim JD, Park KE, Kuwabara N, Shimizu N, Krayukhina E, Uchiyama S, Fukamizu A, Shimizu T
    • 雑誌名

      Journal of Molecular Biology

      巻: 428 ページ: 1197-1208

    • DOI

      10.1016/j.jmb.2016.02.007

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] PRMT8 as a phospholipase regulates Purkinje cell dendritic arborization and motor coordination2015

    • 著者名/発表者名
      Kim JD, Park KE, Ishida J, Kako K, Hamada J, Kani S, Takeuchi M, Namiki K, Fukui H, Fukuhara S, Hibi M, Kobayashi M, Kanaho Y, Kasuya Y, Mochizuki N and Fukamizu A
    • 雑誌名

      Science Advances

      巻: 1 ページ: e1500615

    • DOI

      10.1126/sciadv.1500615

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] ホスホリパーゼ活性を持つアルギニンメチル化酵素の小脳機能に対する役割2016

    • 著者名/発表者名
      金 俊達、石田純治、加香孝一郎、濱田樹理、深水昭吉
    • 学会等名
      第10回炎症・脂質代謝・メタボリサーチフォーラム
    • 発表場所
      東京大学山上会館、東京、文京区
    • 年月日
      2016-02-13
  • [学会発表] ヒスタミンのH3受容体を介した心腎病態に対する作用の検討2015

    • 著者名/発表者名
      野口和之、石田純治、石丸友博、川崎祥平、金 俊達、権 哲源、加香孝一郎、山縣邦弘、深水昭吉
    • 学会等名
      Advans 研究会2015
    • 発表場所
      ホテルグランドパレス、東京都、千代田区
    • 年月日
      2015-12-12
  • [学会発表] 血管内皮タンパク質アルギニンメチル基転移酵素・PRMT1の機能解析2015

    • 著者名/発表者名
      石丸友博、石田純治、金 俊達、橋本美涼、水上早瀬、杉山文博、八神健一、深水昭吉
    • 学会等名
      第19回日本心血管内分泌代謝学会学術総会
    • 発表場所
      神戸国際会議場、兵庫県、神戸
    • 年月日
      2015-12-10
  • [学会発表] アルギニンメチル化酵素PRMT8のホスホリパーゼ活性と生物学的意義2015

    • 著者名/発表者名
      金 俊達、石田純治、加香孝一郎、濱田樹理、深水昭吉
    • 学会等名
      第38回日本分子生物学会年会
    • 発表場所
      神戸ポートアイランド、兵庫県、神戸
    • 年月日
      2015-12-02

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公開日: 2017-01-06  

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