| 研究課題/領域番号 |
15K14726
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
宮澤 陽夫 東北大学, (連合)農学研究科(研究院), 教授 (20157639)
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| 研究分担者 |
仲川 清隆 東北大学, (連合)農学研究科(研究院), 准教授 (80361145)
木村 ふみ子 東北大学, (連合)農学研究科(研究院), 助教 (50321980)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | マイクロアレイ / 食品学 / 動物実験 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は食品成分による非アルコール性脂肪肝炎抑制をめざし、非アルコール性脂肪肝から脂肪肝炎への進展過程を再現した実験動物モデルの作出と、フォーカストアレイによる脂肪肝炎進展時の遺伝子発現群の変化の解析を目的とする。
数百から数十程度の特定の遺伝子を、高精度に解析するフォーカストアレイは、再現性・信頼性が高い特定の目的に特化した解析が可能である。一方で、解析可能な遺伝子数が少ないため、研究目的に合致した遺伝子を搭載する必要があるが、脂肪肝および脂肪肝炎発症関連遺伝子に特化した市販チップは存在しない。H27年度は脂肪肝から肝炎へ進展する過程で関連する遺伝子群について精査し、190の関連遺伝子を搭載したラット専用のフォーカストアレイカスタムチップの作成を行った。すなわち、肝臓での中性脂肪の取り込み、運搬、生合成、分解系、分泌系に関わる蛋白および各調節因子の遺伝子に加え、解糖・糖新生、インスリンシグナル、酸化ストレス、炎症マーカー関わる遺伝子群のリストアップを行い、フォーカストアレイカスタムチップを作成した。さらに、近交系アルビノラットのF344ラットを脂肪肝モデルとして利用するための条件検討を行った。すなわち、F344ラットを高脂肪食または普通食、あるいは飼育開始週齢が異なる高脂肪食で一定期間飼育し、麻酔下の腹部大静脈採血により血漿を得るとともに、主な組織重量を測定後、肝臓、脂肪組織を採取し、試験に供した。その結果、飼育開始週齢が5ヶ月齢のラットで有意な肝臓脂質の上昇が観察された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は当初目標としていた肝臓での中性脂肪の取り込み、運搬、脂質生合成・分解系、解糖・糖新生、インスリンシグナル、酸化ストレス、炎症マーカーに関連する遺伝子群のリストアップを行い、フォーカストアレイカスタムチップ作成した。さらに、予備的に動物試験を行い、飼育開始週齢が高い条件で肝臓の脂質蓄積かみられた。以上のとおり、おおむね計画通りに研究が進展していると言える。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成28年度は作成したモデル動物の詳細な生化学データに測定と解析を進め、選抜した試料について、DNAアレイによる肝障害関連遺伝子群の網羅的発現解析を行う。試験飼育開始時および普通食給与ラットとの発現比の比較から、高脂肪給与による脂肪肝モデルにおいて顕著に変化する遺伝子を抽出し、PCR法による遺伝子発現解析によるデータの再現性の検証を行う。また、主要な変化が観察された蛋白については、ウエスタンブロット法による定量も行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究が順調に推移していたため、次年度予定していたフォーカストアレイ解析の一部を年度末に前倒しで実施することを検討したが、得られたデータの解析の結果、解析に使用する実験群の再検討が必要になったため、実施しなかった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
H27年度に実施しなかったフォーカストアレイ解析を予定通り実施する。
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