| 研究課題/領域番号 |
15K14877
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
杉本 実紀 京都大学, 農学研究科, 助教 (20243074)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 哺乳類 / 卵巣 / 卵胞 / 雌 / 生殖 / 生殖寿命 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、雌性生殖寿命の延長を目的として、卵巣内で長期維持される卵胞の形成を顆粒層前駆細胞の追加ならびに成長因子等により増強する方法を開発しようとしている。本年度は出生前後のマウス卵巣を使用して、細胞表面マーカーを指標とした顆粒層前駆細胞の分離と同発生段階の卵巣への追加・器官培養、増強因子の検討（前年度から継続）を行った。細胞表面マーカーを指標とした細胞の分離については抗Lgr5抗体結合ビーズを使用し、卵巣を分散処理後、抗体結合ビーズによる細胞の分離、回収と蛍光色素（CM-DiI）による標識を行った。回収された細胞を同様に分散させた胎仔～新生仔マウス卵巣細胞と混合してハンギングドロップ法での培養を行い、凝集により細胞塊を形成させた。また、回収された細胞を胎仔～新生仔マウス卵巣の表面に付加し（付着させ）器官培養した。これらの組織切片を作製し蛍光顕微鏡で観察したところ、蛍光が陽性の細胞が存在し、一部が卵胞様構造の顆粒層細胞にあたる位置に観察された。細胞分画の純度ならびに標識細胞の変性後の二次的取り込みの可能性については検討が必要であるが、分離・回収された細胞が卵胞形成に寄与する可能性が示された。増強因子としてR-spondin-1の効果については、前年度から引き続きの検討で新生仔卵巣では明らかな効果が認められなかったが、胎仔期卵巣への添加培養では、原始卵胞形成の促進の可能性を示唆する結果が得られたので、検討を継続している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
顆粒層前駆細胞の分離および卵巣への追加ならびに増強因子の添加ともに培養系での実験を行ったが、移植および投与による個体内での解析に移行することが妥当と考えられる処理法の決定が遅れており、これらの実験が行えていないため。
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| 今後の研究の推進方策 |
前年度までの実験で採取した標本の解析および培養系での追加実験により処理条件を決定し、移植、投与等によるin vivoでの効果を検討する。移植、投与後の経過期間については、研究期間で可能な範囲で検討する。また、処理群間での遺伝子発現の比較により卵胞形成の初期段階での変化の検出を試みる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
次年度使用額が生じた理由は、購入物品等が予定より少なかったことと、キャンペーン等で予定より安価で購入できた試薬、器具等があったためである。使用計画としては試薬、器具類、実験動物等の購入および共通機器使用料を予定している。また、動物実験で使用する麻酔法について基準が改められたので、これに沿って実験をするために麻酔装置を購入する予定である。
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