インフルエンザウイルスHAを標的とした特殊環状ペプチドの発症阻害機序の解明

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K15146
• 研究機関: 公益財団法人東京都医学総合研究所
• 研究代表者: 小原 道法 公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, プロジェクトリーダー (10250218)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: 高病原性トリインフルエンザウイルス / 特殊環状ペプチド / 病態抑制機序

研究実績の概要

ウイルス粒子表面に多数存在するヘマグルチニン(HA)を標的とした特殊環状ペプチド(inhibitor of HA: iHA)の開発を進め、高病原性トリインフルエンザウイルスH5N1および同じGroup1に属するH1N1、H2N2の増殖を阻害する特殊環状ペプチドiHA-100を取得している。H5N1の霊長類感染モデル（カニクイザル）を用いてiHA-100の治療効果を検討し、発症後の投与においても有意な治療効果を確認した。このiHA-100の治療効果に関与する機序の解析を行った。
iHA-100投与カニクイザルの肺では炎症性サイトカイン(IFN-γ, IL-6)およびケモカイン(MIP-1α, MCP-1)の量が有意に減少しており、iHA-100投与により炎症が抑制されていることが示唆された。加えて、IL-15についてもiHA-100投与群で顕著な減少がみられた。IL-15依存性CD8 T 細胞がインフルエンザウイルス感染における急性肺病態の病原性に関与するという報告(J.Virol. 84:5574-82, 2010) もあり、上述のIL-15の減少についてもiHA-100の病態抑制機序に関与している可能性がある。我々はさらに、iHA-100投与マウスの脾臓細胞において①IFN-γ陽性のCD4+T, CD8+T細胞が増加する②抗原提示細胞（樹状細胞、マクロファージ）のMHC classII, CD86発現が上昇するという知見を得ている。これらの事から、iHA-100投与により免疫担当細胞（マクロファージ、樹状細胞、CD4陽性T細胞、CD8陽性T細胞など）に対して影響をおよぼしている可能性も考えられる。今後は、iHA-100の病態抑制機序について、免疫学的な解析を進めていく予定である。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

H5N1の霊長類感染モデル（カニクイザル）を用いてiHA-100の治療効果を検討し、発症後の投与においても有意な治療効果を確認した。

今後の研究の推進方策

iHA-100投与により免疫担当細胞（マクロファージ、樹状細胞、CD4陽性T細胞、CD8陽性T細胞など）に対して影響をおよぼしている可能性も考えられる。今後は、iHA-100の病態抑制機序について、免疫学的な解析を進めていく予定である。

次年度使用額が生じた理由

iHA-100の治療効果に関与する機序の解析を行った。iHA-100投与カニクイザルの肺では炎症性サイトカインの顕著な変化が認められた。この炎症性サイトカインの変化と急性肺炎病態の関連性についてマウスでも検討するために、サイトカイン定量キットの購入を予定していたが本年度中に全ての検体作製はできなかった。キットは使用期限が短いためにあらかじめ購入しておくことはできないので、次年度に購入することとした。

次年度使用額の使用計画

iHA-100の治療効果に関与する機序の解析のためにiHA-100投与マウスでの炎症性サイトカインの変化と急性肺炎病態の関連性について検討する。このためのサイトカイン定量キットを購入する。

研究成果

• [雑誌論文] Susceptibility and initial immune response of Tupaia belangeri cells to dengue virus infection (2017)
  • 著者名/発表者名: Kayesh MEH, Kitab B, Sanada T, Hayasaka D, Morita K, Kohara M, *Tsukiyama-Kohara K
  • 雑誌名: Infect Genet Evol. 巻: 51 ページ: 203-210
  • DOI: 10.1016/j.meegid.2017.04.003
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Sensitization with vaccinia virus harboring hemagglutinin recovers the immune potential against highly pathogenic H5N1 influenza virus in non-human primates (2016)
  • 著者名/発表者名: Fumihiko Yasui, Yasushi Itoh, Ai Ikejiri, Masahiro Kitabatake, Nobuo Sakaguchi, Keisuke Munekata, Shintaro Shichinohe, Yukiko Hayashi, Hirohito Ishigaki, Misako Nakayama, Yoshihiro Sakoda, Hiroshi Kida, Kazumasa Ogasawara, *Michinori Kohara
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 6 ページ: 37915
  • DOI: 10.1038/srep37915
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Enhancement of anti-S 1 TLV-1/HTLV-1 immune responses through multimodal effects of anti-CCR4 antibody (2016)
  • 著者名/発表者名: Kenji Sugata, Jun-ichirou Yasunaga, Michi Miura, Hirofumi Akari, Atae Utsunomiya, Kisato Nosaka, Yuko Watanabe, Hitoshi Suzushima, Ki-Ryang Koh, Masanori Nakagawa, Michinori Kohara, *Masao Matsuoka.
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 6 ページ: 27150
  • DOI: 10.1038/srep27150
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] インフルエンザウイルス感染阻害活性を示すヘマグルチニン結合性特殊環状ペプチド (2016)
  • 著者名/発表者名: 斉藤 誠、安井文彦、棟方 翼、飛田良美、小澤 真、小原恭子、伊藤利紗、菅 裕明、窪田規一、小原道法
  • 学会等名: 第39回日本分子生物学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 （神奈川県横浜市）
  • 年月日: 2016-11-30 – 2016-12-02
• [学会発表] ワクチニアウイルスDls株を母体としたインフルエンザHA組換えワクチンのカニクイザルでの八章防御効果の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 宗片圭祐、安井文彦、伊藤 靖、石井孝司、喜田 宏、小笠原一誠、小原道法
  • 学会等名: 第20回日本ワクチン学会学術集会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京都新宿区）
  • 年月日: 2016-10-22 – 2016-10-23
• [学会発表] Prevention effect of H5N1 HPAI and H1N1 pdm2009 influenza vaccine based on highly attenuated vaccinia virus vector in cynomolgus monkeys (2016)
  • 著者名/発表者名: Munekata K., Yasui F., Itoh Y., Ishii K., Sakoda Y., Kida H., Ogasawara K., Kohara M.
  • 学会等名: 10th Vaccine Congress
  • 発表場所: Amsterdam, the Netherlands
  • 年月日: 2016-09-04 – 2016-09-07
  • 国際学会