安定同位体ラベルヒト初代培養肝細胞とウイルスを用いた抗ウイルス治療の開発

2016 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K15293
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 茶山 一彰 広島大学, 医歯薬保健学研究院(医), 教授 (00211376)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: B型肝炎ウイルス / ヒト肝細胞 / キメラマウス / HepaRG / HepG2 / NTCP

研究実績の概要

肝炎ウイルスは肝細胞癌の重要な原因因子とされている。ウイルス蛋白はユビキチン化を含め多彩な修飾を受けており、その詳細は明らかにされていない。これらのうちのいくつかがウイルスの増殖に必須である可能性は高く、このような修飾を阻害する薬剤が新規抗ウイルス薬となる可能性は高い。本研究者はこれまでにヒト肝細胞キメラマウスを使用して、型炎ウイルスに関する研究を行ってきた。研究を行っていくうちに、新しいウイルス蛋白の修飾や宿主蛋白の解析に安定同位体によるラベルを行った肝細胞が有用で有り、技術的に可能であることを見い出した。安定同位体でラベルしたヒト肝細胞キメラマウスを作製し、その細胞を使用することによって様々な解析が可能となる。本研究では安定同位体を導入した食餌をマウスに与えて飼育し、マウスがラベル可能であるかどうかを検討した。マウスの種類により食事の好みが激しく、ヒト肝細胞キメラマウスでは十分な摂取が困難であることが明らかになった。現在他のマウス種によるヒト肝細胞キメラマウスを作製しており、肝炎ウイルスの感染が確認できた。今後このような新しいキメラマウスを使用してラベルの実験を行っていく。
平成27年度に引き続き28年以降は、このようにして作製したマウスにB型肝炎ウイルスやC型肝炎ウイルスなど、肝臓を増殖の首座とするウイルスを感染させ、様々な時期にマウスをsacrificeし、蛋白を抽出、nano-LC-TOF-MASにより解析する。この方法はマラリアなど、肝臓を首座とする病原体に応用も可能であり拡張性は高いと考えられる。

研究成果

• [雑誌論文] Interferon stimulated genes and innate immune activation following infection with hepatitis B and C viruses. (2017)
  • 著者名/発表者名: Hayes CN, Chayama K.
  • 雑誌名: J Med Virol. 巻: 89 ページ: 388-396.
  • DOI: 10.1002/jmv.24659
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The relationship between HBcrAg and HBV reinfection in HBV related post-liver transplantation patients. (2017)
  • 著者名/発表者名: Urabe A, Imamura M, Tsuge M, Kan H, Fujino H, Fukuhara T, Masaki K, Kobayashi T, Ono A, Nakahara T, Kawaoka T, Hiramatsu A, Kawakami Y, Aikata H, Hayes CN, Maki N, Ohdan H, Chayama K.
  • 雑誌名: J Gastroenterol. 巻: 52 ページ: 366-375.
  • DOI: 10.1007/s00535-016-1240-y
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Interferon-stimulated gene of 20 kDa protein (ISG20) degrades RNA of Hepatitis B virus to impede the replication of HBV in vitro and in vivo. (2016)
  • 著者名/発表者名: Leong CR, Funami K, Oshiumi H, Mengao D, Takaki H, Matsumoto M, Aly HH, Watashi K, Chayama K, Seya T.
  • 雑誌名: Oncotarget. 巻: 7 ページ: 68179-68193.
  • DOI: 10.18632/oncotarget.11907
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Antiviral effects of anti-HBs immunoglobulin and vaccine on HBs antigen seroclearance for chronic hepatitis B infection. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tsuge M, Hiraga N, Uchida T, Kan H, Miyaki E, Masaki K, Ono A, Nakahara T, Abe-Chayama H, Zhang Y, Naswa MG, Kawaoka T, Miki D, Imamura M, Kawakami Y, Aikata H, Ochi H, Hayes CN, Chayama K.
  • 雑誌名: J Gastroenterol. 巻: 51 ページ: 1073-1080.
  • DOI: 10.1007/s00535-016-1189-x
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Highly multiplexed CRISPR-Cas9-nuclease and Cas9-nickase vectors for inactivation of hepatitis B virus. (2016)
  • 著者名/発表者名: Sakuma T, Masaki K, Abe-Chayama H, Mochida K, Yamamoto T, Chayama K.
  • 雑誌名: Genes Cells. 巻: 21 ページ: 1253-1262.
  • DOI: 10.1111/gtc.12437
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Novel pH-sensitive multifunctional envelope-type nanodevice for siRNA-based treatments for chronic HBV infection. (2016)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto N, Sato Y, Munakata T, Kakuni M, Tateno C, Sanada T, Hirata Y, Murakami S, Tanaka Y, Chayama K, Hatakeyama H, Hyodo M, Harashima H, Kohara M.
  • 雑誌名: J Hepatol. 巻: 64 ページ: 547-555.
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2015.10.014
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] RNA Exosome Complex Regulates Stability of the Hepatitis B Virus X-mRNA Transcript in a Non-stop-mediated (NSD) RNA Quality Control Mechanism. (2016)
  • 著者名/発表者名: Aly HH, Suzuki J, Watashi K, Chayama K, Hoshino S, Hijikata M, Kato T, Wakita T.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 巻: 291 ページ: 15958-15974.
  • DOI: 10.1074/jbc.M116.724641
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Effect of tenofovir disoproxil fumarate on drug-resistant HBV clones. (2016)
  • 著者名/発表者名: Murakami E, Tsuge M, Hiraga N, Kan H, Uchida T, Masaki K, Nakahara T, Ono A, Miki D, Kawaoka T, Abe H, Imamura M, Aikata H, Ochi H, Hayes CN, Akita T, Tanaka J, Chayama K.
  • 雑誌名: J Infect. 巻: 72 ページ: 91-102.
  • DOI: 10.1016/j.jinf.2015.09.038
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Early events in hepatitis B virus infection: From the cell surface to the nucleus. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hayes CN, Zhang Y, Makokha GN, Hasan MZ, Omokoko MD, Chayama K.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol. 巻: 31 ページ: 302-309.
  • DOI: 10.1111/jgh.13175
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Targeting Host and Viral Interactions: Insights from Mice Model (2017)
  • 著者名/発表者名: Kazuaki Chayama
  • 学会等名: Asian Pacific Association for the Study of the Liver 2017（APASL 2017） (アジア太平洋肝臓病学会議)
  • 発表場所: 上海（中国）
  • 年月日: 2017-02-17 – 2017-02-17
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] Recent Progress in Treatment for Chronic Hepatitis C (2016)
  • 著者名/発表者名: 茶山 一彰
  • 学会等名: 2016アジア太平洋消化器病週間(APDW2016)
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2016-11-05 – 2016-11-05
  • 国際学会
• [学会発表] B型慢性肝炎治療の軌跡 (2016)
  • 著者名/発表者名: 茶山 一彰
  • 学会等名: 第20回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2016-11-04 – 2016-11-04
• [学会発表] Integrated safety and Tolerability of DCV+ASV in Patients with Chronic HCV Genotype 1b Infection (2016)
  • 著者名/発表者名: Kazuaki Chayama
  • 学会等名: 2016 APASL Single Topic Conference on Hepatitis C
  • 発表場所: 高雄（台湾）
  • 年月日: 2016-06-12 – 2016-06-12
  • 国際学会
• [学会発表] Best Strategy for Curing HCV Genotype 1 and 4: East vs. West (2016)
  • 著者名/発表者名: Kazuaki Chayama
  • 学会等名: 2016 APASL Single Topic Conference on Hepatitis C
  • 発表場所: 高雄（台湾）
  • 年月日: 2016-06-11 – 2016-06-11
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] A mouse model of human CTL mediated severe acute hepatitis B (2016)
  • 著者名/発表者名: 茶山 一彰
  • 学会等名: 第52回日本肝臓学会総会 特別企画1-JSH主催EASL Joint Meeting
  • 発表場所: 幕張
  • 年月日: 2016-05-20 – 2016-05-20
• [学会発表] B型肝炎 (2016)
  • 著者名/発表者名: 茶山 一彰
  • 学会等名: 第52回日本肝臓学会総会前期教育講演会
  • 発表場所: 幕張
  • 年月日: 2016-05-20 – 2016-05-20
• [備考] 広島大学病院消化器・代謝内科ホームページ
  • URL: http://shounai.hiroshima-u.ac.jp/liver.html