| 研究課題/領域番号 |
15K15336
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| 研究機関 | 金沢大学 |
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研究代表者 |
山田 正仁 金沢大学, 医学系, 教授 (80191336)
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| 研究分担者 |
濱口 毅 金沢大学, 附属病院, 講師 (70452109)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 脳アミロイドアンギオパチー / アミロイドβ蛋白 / 伝播 / 剖検脳 / アルツハイマー病 |
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| 研究実績の概要 |
孤発性脳アミロイドアンギオパチー（CAA）においてアミロイドβ蛋白（Aβ）が脳血管選択的に沈着する原因は不明である。申請者は、孤発性CAA特異的なAβ株が存在し、それが中枢神経系に直接あるいは末梢ルートから投与された場合、CAAが伝播するという仮説を立て、孤発性CAA伝播実験によるCAA特異的Aβ株の確立等を目的に研究を行った。
申請者らの仮説によれば、pure CAA群はCAA特異的なAβ株を有し、感受性マウスへの接種により、CAA病理が伝播される。それを検証するため、CAAや対照群の剖検脳サンプルの遺伝子改変マウスへの脳内接種実験を行った。高齢者300剖検例から、A群（n = 3）[高度のCAAを有するが、老人斑（SP）を欠く（pure CAA）]、B群（n = 3）[ADで多数のSPを有するが、CAAを欠く（pure AD）]、C群（n = 3）[ADで多数のSPばかりでなく、高度のCAAを随伴する（AD+CAA）]、D群（n = 3）[SPもCAAもみられない正常対照脳]の4群を抽出し、その脳ホモジネートをR1.40 APP transgenicマウス（ホモ接合体）（3ヶ月齢）に脳内接種し、10ヶ月齢でサクリファイスしてマウス半脳を病理学的検索用に、半脳を生化学的検索用に処理した。そのマウス脳とサンプルの由来するヒト剖検脳の免疫組織化学的な比較解析を開始した。今後、オリジナルのヒト剖検脳のアミロイド病変に対応し、それぞれに特異的なアミロイド沈着型がマウス脳に出現しているかどうかを病理及びWestern blotで解明する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成27年にCAA及び対照群の剖検脳サンプルおよび遺伝子改変マウス（R1.40 APPホモ接合体）を準備し、平成27年度から28年度にかけて脳サンプルのマウスへの接種実験を行い、実験計画はほぼ順調に進展してきた。平成29年度はその解析結果により、継代接種実験、"CAA特異的Aβ株”のin vitro検出系の開発などを行う。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成28年度までに行われたヒトCAA脳のR1.40 APPマウスへの伝播実験の結果を解析し、その結果、孤発性CAAが伝播するかどうかを検証する。Positiveな結果の場合、CAA特異的Aβ株の樹立、そのin vitro検出系の作成のため、以下の研究を行う：
[1] R1.40 APP transgenicマウスへの継代接種実験：A～D群の剖検脳サンプルを接種されたマウス脳のホモジネートを、さらに次のR1.40 APP transgenicマウス（ホモ接合体）（3ヶ月齢）に脳内接種し、10ヶ月齢で脳病変を解析する。継代接種によりCAA病理が継代されることが示すことにより、CAA特異的Aβ株を樹立する。また、末梢に投与した場合にCAAを伝播させることができるか否かを検討するために、R1.40 APP transgenicマウス（ホモ接合体）腹腔内投与を行い、マウスの脳病変を経時的に検索する。
[2] CAA特異的Aβ株in vitro検出系の開発：試験管内Aβ40/Aβ42凝集系に、マウス脳のホモジネートをシードとして加え、CAA特異的なAβコンフォメーションとSP特異的なAβコンフォメーションのseeding効果の差異を明らかにする。それにより、それらを区別して検出する方法を考案する。
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