ゲノム編集による高IgE症候群の新規治療法の開発

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K15392
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 峯岸 克行 徳島大学, 疾患プロテオゲノム研究センター, 教授 (10343154)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 小児科学 / 免疫不全症 / STAT3 / ゲノム編集

研究実績の概要

高IgE症候群の新規治療法を開発するため、高IgE症候群のモデルマウスを樹立した。正常のSTAT3遺伝子を利用して、ES細胞のおけるSTAT3-DNの発現を防ぎ、コンディショナルにStat3-DNを発現するマウス系統を樹立、これを全身にCre recombinaseを発現するマウスと交配することにより、ヒトと同様に全身組織にSTAT3-DNを発現する疾患モデルマウスを樹立した。

高IgE症候群はSTAT3遺伝子の片アレルの１塩基置換により発症する疾患であるため、その治療には、STAT3の変異アレルを特異的に切断し、野生型(WT)のSTAT3アレルを切断しないCRISPR/Cas9を使用することが必要である。そこで、２重鎖切断によりGFPの発現が誘導されるレポーターアッセイを行った。このレポーターはGFPを２つに分割し482bpのオーバーラップ領域を導入、その間に野生型または、変異体のSTAT3アレルを導入している。２重鎖切断が誘導されると、分割され蛍光を発しないGFPがsingle strand annealingによりオーバーラップ領域を介して活性を持つGFPとなり蛍光を発する。このため、野生型のStat3を持つレポーター(Stat3-WT)に対してはGFPの発現を誘導せず、変異型を持つレポーターではGFPを発現するCRISPRを探索する。このレポーターアッセイによりStat3変異体遺伝子を特異的に切断し、Stat3野生型遺伝子は切断しないCRISPRを見出すことに成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Human TYK2 deficiency: Mucobacterial and viral infections without hyper-IgE syndrome. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kreins AY, Ciancanelli MJ, Okada S, Migaud M, Deswarte C, Alsina L, Kotlarz D, Klein C, Muller-Fleckenstein I, Fleckenstein B, Cormier-Daire V, Rose-John S, Picard C, Hammarstrom L, Puel A, Al-Muhsen S, Abel L, Chaussabel D, Rosenzweig SD, Minegishi Y, Tangye SG, Bustamante J, Casanova JL, Boisson-Dupuis S
  • 雑誌名: J Exp Med 巻: 212 ページ: 1641-1662
  • DOI: doi: 10.1084/jem.20140280.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Monogeneic mutations differentially affect the quality of T follicular helper cells in pateints with human primary immunodeficiencies. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ma CS, Wong N, Campbell DE, Stormon MO, Wong M, Adelstein S, Smart JM, Fulcher DA, Cook MC, Phan TG, Stepensky P, Boztug K, Kansu A, Baumann U, Beier R, Roscioli T, Ziegler JB, Gray P, Picard C, Grimbacher B, Warnatz K, Holland SM, Casanova JL, Uzel G, Tangye SG
  • 雑誌名: J Allergy Clin Immunol 巻: 136 ページ: 993-1006
  • DOI: doi: 10.1016/j.jaci.2015.05.036.
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] 高IgE症候群 (2015)
  • 著者名/発表者名: 峯岸克行
  • 雑誌名: 臨床免疫アレルギー科 巻: 63 ページ: 251-253
• [雑誌論文] AD-HIES (Job’s症候群） (2015)
  • 著者名/発表者名: 峯岸克行
  • 雑誌名: 日本臨床 免疫症候群III 巻: 34 ページ: 235-237
• [雑誌論文] Comel-Netherton症候群 (2015)
  • 著者名/発表者名: 峯岸克行
  • 雑誌名: 日本臨床 免疫症候群III 巻: 34 ページ: 238-239
• [雑誌論文] PGM3欠損症 (2015)
  • 著者名/発表者名: 峯岸克行
  • 雑誌名: 日本臨床 免疫症候群III 巻: 34 ページ: 240-241
• [雑誌論文] 高IgE症候群 (Job症候群) (2015)
  • 著者名/発表者名: 峯岸克行
  • 雑誌名: 小児科診療 巻: 79 ページ: 352
• [学会発表] Molecular pathogenesis of hyper-IgE syndrome (2016)
  • 著者名/発表者名: Minegishi Y
  • 学会等名: The 5th Bizan Immunology Symposium
  • 発表場所: Tokushima University (徳島県・徳島市)
  • 年月日: 2016-03-03 – 2016-03-04
  • 国際学会
• [学会発表] Dysregulationof T cell dependent antibody response in a murine model of hyper IgE syndrome (2015)
  • 著者名/発表者名: Nishikawa Y, Wada T, Minegishi Y
  • 学会等名: The 44th annual meeting of the Japanese society for Immunology
  • 発表場所: Sapporo Convention Center (北海道・札幌市)
  • 年月日: 2015-11-18 – 2015-11-20
  • 国際学会
• [学会発表] Hyper-IgE syndrome model mice exhibit the susceptibility to Staphyloccocus aureus infection (2015)
  • 著者名/発表者名: Wada T, Nishikawa Y, Minegishi Y
  • 学会等名: The 44th annual meeting of the Japanese society for Immunology
  • 発表場所: Sapporo Convention Center (北海道・札幌市)
  • 年月日: 2015-11-18 – 2015-11-20
  • 国際学会