| 研究課題/領域番号 |
15K15393
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
原 寿郎 九州大学, 生体防御医学研究所, 共同研究員 (40150445)
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| 研究分担者 |
高田 英俊 九州大学, 医学研究院, 教授 (70294931)
山元 裕之 九州大学, 環境発達医学研究センター, 学術研究員 (00710170)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 遺伝子治療 / 人工ヌクレアーゼ |
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| 研究実績の概要 |
標的遺伝子であるBTK 遺伝子を特異的に切断するCRISPR-Cas9 発現プラスミドを作製し、ヒト血球系細胞株にトランスフェクションして、配列特異的なDNA 切断効率を調べた。
ヒト血球系細胞株にヘルパー依存型アデノ・アデノ随伴ウイルスベクターを感染させることで、BTK 遺伝子を搭載したドナーDNA を細胞に導入した。さらに、CRISPR-Cas9 発現プラスミドをトランスフェクションによる細胞導入を行った。この細胞をピューロマイシンにて薬剤選択による、シングルセルクローニングを行った。得られたクローンよりDNA を抽出し、ターゲティングの頻度を算出した。結果、ヒト血球系細胞株でのターゲティング効率は、ウイルスベクター単独に比べて高効率であった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターと人工ヌクレアーゼであるCRISPR-Cas9を併用することで、ターゲティング効率の向上を認めた。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成27年度に得られた結果を基にして、in vitroで正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性造血幹細胞のターゲティング・B細胞系への分化誘導実験を試みる。ヒトXLAモデルマウスを用いた遺伝子ターゲティング解析とB細胞再構築の検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成27年度に行う研究と今後行う予定の研究との順番を入れ替えたため、次年度使用額が生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性細胞でのターゲティングを行い、その経費に充てることにしたい。
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