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2016 年度 実績報告書

2本鎖形成ピレン修飾核酸の蛍光発光によるジストロフィンmRNAの可視化

研究課題

研究課題/領域番号 15K15395
研究機関神戸学院大学

研究代表者

松尾 雅文  神戸学院大学, 総合リハビリテーション学部, 教授 (10157266)

研究期間 (年度) 2015-04-01 – 2017-03-31
キーワードエクソンスキッピング / ジストロフィン遺伝子 / スプライシング
研究実績の概要

デュシェンヌ型筋ジストロフィーの治療としてエクソンスキッピング誘導が最も有力なものとして注目されている。この方法では、ジストロフィン遺伝子内の79ケのエクソンの中で、11のエクソンがスキッピング誘導の有力な対象となる。これらのエクソンのスキッピングを誘導する化合物の同定は喫緊の課題である。そこで、これら11のエクソンを対象としてミニ遺伝子を構築し、それらのスプライシングを一挙に解析できる高性能スプライシングアッセイ系を構築してきた。しかし、この系ではスプライシング産物をRT・PCR法により解析するため労力と費用を要した。本研究は、エクソンスキッピングしたmRNAを蛍光を用いて直接検出する高性能の方法の確立をはかるものである。
このスプライシングアッセイ系の実用性について証拠を得るために、候補となる化合物についてそのエクソンスキッピング誘導能を既確立のRT-PCR法により解析した。その結果、この系を用いることにより、エクソンスキッピング誘導能を有する化合物のみならず、スプライシングを抑制する化合物の同定が可能なことが判明した。現在、スプライシング抑制化合物を探索中である。
一方、細胞内に導入したミニ遺伝子から産生される標的mRNAの蛍光による検出については、標的となるRNAの人工合成、プローブとなるENA核酸配列の選択と合成などを行った。そして、検出のためのレーザー波長の検討、検出能の分析、検出システムの再構築などの検討を実施した。こうした蛍光検出系の基盤の整備を進め、蛍光検出システムの確立をはかってきたが、予想外に蛍光が弱く、システムの改良をはかっている。
本検出系を用いたスプライシングアッセイ系の有効性は確認されたので、本研究については今後も引き続き行い、早急にエクソンスキッピングしたジストロフィンmRNAの蛍光検出系を確立するものである。

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公開日: 2018-01-16  

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