KITのSH3ドメイン機能獲得変異に着目した悪性黒色腫の新規治療標的分子の同定

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K15414
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 杉浦 一充 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70335032)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2017-03-31
• キーワード: 悪性黒色腫 / ｃ－ＫＩＴ

研究実績の概要

本研究の目的は2つある。目的１は、KIT変異による悪性黒色腫の新規治療標的分子を同定すること。はじめに3種（後述）のc-kitを恒常発現する無色素性メラノーマ細胞株を用いてプロテオーム解析で網羅的に比較解析をして標的分子を絞り込む。次にヒトの悪性黒色腫組織の免疫組織化学をして標的分子を同定する。申請者らは稀な遺伝性の全身性色素斑の病因遺伝子同定の研究で、臨床的に色素産生は来すが悪性腫瘍化は来さない、全く新しいタイプのKIT変異（SH3ドメインを創出する変異）を発見した。3種のc-kitとは、１つはこの新しいタイプの変異、1つは悪性腫瘍化を来す変異、そして野生型である。標的分子が同定されれば、KIT変異による悪性黒色腫の新規治療法の開発へ繋がっていく。目的2は、発見したKIT変異が本当にSH3ドメインを創出する変異か否かについて結合するタンパク質の同定とともに解明すること。悪性腫瘍化変異（c-kit p.Lys642Gluとc-kit p.Asp820Tyr）、非悪性腫瘍化変異(c-kit p.Ala829Pro)、c-kit野生型を恒常的に発現する無色素性メラノーマ由来細胞株を作成し、以下の実験1、2、3で使用した。１．プロテオーム解析でc-kit p.Ala829Proが細胞内領域にSH3ドメインを創出する変異であることを特異的に結合するタンパク質の同定とともに解明した。2．c-kit恒常発現株それぞれの増殖能をBrdU ELISAで比較検討した。3．悪性腫瘍化変異と非悪性腫瘍化変異と野生型の恒常発現株の抽出液のタンパク質発現をプロテオーム解析で比較検討し、悪性腫瘍化変異恒常発現株に特異的に発現するタンパク質群を抽出した。

現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

実験の実施を予定していた研究協力者の大学院生3名が、子供（幼少時）の慢性かつ手厚い保護をすべき疾病、夫の留学に伴い渡米、一身上の都合で退学などの理由により、実験に大幅な遅れが生じた。

今後の研究の推進方策

１．50例の悪性黒色腫のパラファイン切片からDNAを抽出し、KIT変異を解析する。2．KIT変異による悪性黒色腫組織において、実験3のプロテオーム解析で抽出したタンパク質群について免疫組織化学を実施する。最後に、2で発現の認められた分子をKIT変異による悪性黒色腫の新規治療標的分子として提言する。治療標的分子は悪性黒色腫の免疫組織化学での新規診断マーカーとしても期待される。

次年度使用額が生じた理由

実験の実施を予定していた研究協力者の大学院生3名が、子供（幼少時）の慢性かつ手厚い保護をすべき疾病、夫の留学に伴い渡米、一身上の都合で退学などの理由により、実験に大幅な遅れが生じた。

次年度使用額の使用計画

DNAを抽出試薬、PCR試薬、免疫組織化学試薬などに使用する。

研究成果

• [雑誌論文] Unilateral generalized linear porokeratosis with nail dystrophy. (2016)
  • 著者名/発表者名: Kono M, Yokoyama N, Ogawa Y, Takama H, Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol 巻: 43 ページ: 286-7.
  • DOI: 10.1111/1346-8138.13204.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Noteworthy clinical findings of harlequin ichthyosis: Digital autoamputation caused by cutaneous constriction bands in a case with novel ABCA12 mutations. (2016)
  • 著者名/発表者名: Tanahashi K, Sugiura K, Sato T, Akiyama M.
  • 雑誌名: Br J Dermatol 巻: 174 ページ: 689-91.
  • DOI: 10.1111/bjd.14228.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Bi-allelic nonsense mutations in ABHD5 underlie a mild phenotype of Dorfman-Chanarin syndrome. (2016)
  • 著者名/発表者名: Takeichi T, Sugiura K, Tso S, Simpson MA, McGrath JA, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol Sci, 巻: 81 ページ: 134-6.
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2015.10.015.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Anti-transcription intermediary factor 1-γ antibody-positive clinically amyopathic dermatomyositis complicated by interstitial lung disease and breast cancer. (2016)
  • 著者名/発表者名: Ogawa M, Sugiura K, Yokota K, Muro Y, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Eur Acad Dermatol Venereol 巻: 30 ページ: 373-5.
  • DOI: 10.1111/jdv.12797.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) levels reflect the disease activity in a patient with bullous pemphigoid. (2016)
  • 著者名/発表者名: Nin-Asai R, Muro Y, Sekiya A, Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Eur Acad Dermatol Venereol 巻: 30 ページ: 327-8.
  • DOI: 10.1111/jdv.12719.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Apparent homozygosity due to compound heterozygosity of one point mutation and an overlapping exon deletion mutation in ABCA12. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shibata A, Sugiura K, Suzuki A, Ichiki T, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 巻: 80 ページ: 196-202.
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2015.10.003.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Magnetic resonance imaging findings are useful for evaluating the three dimensional development and follow-up of linear lupus erythematosus profundus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ogawa M, Muro Y, Sugiura K, Sakakibara A, Akiyama M.
  • 雑誌名: Lupus 巻: 24 ページ: 1214-6.
  • DOI: 10.1177/0961203315574559.
  • 査読あり
• [雑誌論文] What are the "True" Pathogenic Anti-desmoglein Antibodies? (2015)
  • 著者名/発表者名: Muro Y, Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: Acta Derm Venereol 巻: 95 ページ: 872-4.
  • DOI: 10.2340/00015555-2119.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Successful treatment with infliximab of sibling cases with generalized pustular psoriasis caused by deficiency of interleukin-36 receptor antagonist. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiura K, Endo K, Akasaka T, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Eur Acad Dermatol Venereol 巻: 29 ページ: 2054-6.
  • DOI: 10.1111/jdv.12590.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lamellar ichthyosis caused by a previously unreported homozygous ALOXE3 mutation in East Asia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: Acta Derm Venereol 巻: 95 ページ: 858-9.
  • DOI: 10.2340/00015555-2022.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Porokeratotic eccrine ostial and dermal duct nevus with a somatic homozygous or monoallelic variant of connexin 26. (2015)
  • 著者名/発表者名: Noda K, Sugiura K, Kono M, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 巻: 80 ページ: 74-6.
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2015.07.003.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel indel mutation of STS underlies a new phenotype of self-healing recessive X-linked ichthyosis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takeichi T, Sugiura K, Chao-Kai Hsu CK, Tanahashi K, Takama H, Michael A Simpson, MA, McGrath JA, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 巻: 79 ページ: 317-9.
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2015.07.001.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] High incidence of cancer in anti-small ubiquitin-like modifier activating enzyme antibody-positive dermatomyositis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Muro Y, Sugiura K, Nara M, Sakamoto I, Suzuki N, Akiyama M.
  • 雑誌名: Rheumatology (Oxford) 巻: 54 ページ: 1745-7.
  • DOI: 10.1093/rheumatology/kev247.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Topical minoxidil improves congenital hypotrichosis caused by LIPH mutations. (2015)
  • 著者名/発表者名: Tanahashi K, Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: Br J Dermatol 巻: 173 ページ: 865-6.
  • DOI: 10.1111/bjd.13790.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Impetigo herpetiformis with IL36RN mutations in a Chinese patient: A founder haplotype of c.115+6T>C in East Asia. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiura K, Nakasuka A, Kono H, Kono M, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 巻: 79 ページ: 319-20.
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2015.06.003.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dowling-Degos disease with mutations in POFUT1 is clinicopathologically distinct from reticulate acropigmentation of Kitamura. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kono M, Suganuma M, Takama H, Zarzoso I, Saritha M, Bodet D, Aboobacker S, Kaliaperumal K, Suzuki T, Tomita Y, Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: Br J Dermatol 巻: 173 ページ: 584-6.
  • DOI: 10.1111/bjd.13702.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] A case of annular pustular psoriasis with heterozygous IL36RN mutation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Miyake T, Umemura H, Doi Y, Kousogabe J, Tsuji K, Hamada T, Sugiura K, Aoyama Y, Akiyama M, Iwatsuki K.
  • 雑誌名: Eur J Dermatol 巻: 25 ページ: 349-50.
  • 査読あり
• [雑誌論文] The novel GJB3 mutation p.Thr202Asn in the M4 transmembrane domain underlies erythrokeratodermia variabilis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiura K, Arima M, Matsunaga K, Akiyama M.
  • 雑誌名: Br J Dermatol 巻: 173 ページ: 309-11.
  • DOI: 10.1111/bjd.13641.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Elderly-onset generalized pustular psoriasis without previous history of psoriasis vulgaris. (2015)
  • 著者名/発表者名: Aizu T, Matsui A, Takiyoshi N, Akasaka E, Kaneko T, Nakano H, Sugiura K, Akiyama M, Sawamura D.
  • 雑誌名: Case Rep Dermatol 巻: 7 ページ: 187-93.
  • DOI: 10.1159/000438505.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Update on autosomal recessive congenital ichthyosis: mRNA analysis using hair samples is a powerful tool for genetic diagnosis. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiura K, Akiyama M.
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 巻: 79 ページ: 4-9.
  • DOI: 10.1016/j.jdermsci.2015.04.009.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Essential role of the cytochrome P450 CYP4F22 in the production of acylceramide, the key lipid for skin permeability barrier formation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohno Y, Nakamichi S, Ohkuni A, Kamiyama N, Naoe A, Tsujimura H, Yokose U, Sugiura K, Ishikawa J, Akiyama M, Kihara A.
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci U S A 巻: 112 ページ: 7707-12.
  • DOI: 10.1073/pnas.1503491112.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Annular elastolytic giant cell granuloma successfully treated with minocycline hydrochloride. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nanbu Ai, Sugiura K, Kono M, Muro Y, Akiyama M.
  • 雑誌名: Acta Derm Venereol 巻: 95 ページ: 756-7.
  • DOI: 10.2340/00015555-2056.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pustular psoriasis like lesions associated with hereditary lactate dehydrogenase M-subunit deficiency without interleukin-36 receptor antagonist mutation: Long-term follow-ups of two cases. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ito T, Aoshima M, Sugiura K, Fujiyama N, Ito N, Sakabe JI, Akiyama M, Maekawa M, Tokura Y.
  • 雑誌名: Br J Dermatol 巻: 172 ページ: 1674-6.
  • DOI: 10.1111/bjd.13590.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Diversity of humoral responses to thecentromere proteins among HCV-relatedchronic liver disease, PBC and AIH patients. (2015)
  • 著者名/発表者名: Himoto T, Tanaka N, Saito A, Muro Y, Sugiura K, Tani J, Miyoshi H, Morishita A, Yoneyama H, Haba R, Masaki T.
  • 雑誌名: Clin Res Hepatol Gastroenterol 巻: 39 ページ: 222-9.
  • DOI: 10.1016/j.clinre.2014.08.004.
  • 査読あり
• [雑誌論文] TRPS1 haploinsufficiency results in increased STAT3 and SOX9 mRNA expression in hair follicles in trichorhinophalangeal syndrome. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shibata A, Tanahashi K, Sugiura K, Akiyama M
  • 雑誌名: Acta Derm Venereol 巻: 95 ページ: 620-1.
  • DOI: 10.2340/00015555-1948.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 皮膚の自己炎症性疾患、DITRAとCAMPS：遺伝学的研究からわかってきたこと (2016)
  • 著者名/発表者名: 杉浦一充
  • 学会等名: 第40回皮膚科免疫セミナー
  • 発表場所: 経団連会館 東京都千代田区
  • 年月日: 2016-03-05
  • 招待講演
• [学会発表] Genetic background of pustular psoriasis (2015)
  • 著者名/発表者名: Sugiura K.
  • 学会等名: 日本研究皮膚科学会第40回年次学術大会・総会
  • 発表場所: 岡山コンベンションセンター 岡山県岡山市
  • 年月日: 2015-12-13
  • 招待講演
• [学会発表] 膿疱症 up-to-date (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉浦一充
  • 学会等名: 平成27年度生涯教育講演会第274回日本皮膚科学会東海地方会
  • 発表場所: 大正製薬名古屋支店 愛知県名古屋市
  • 年月日: 2015-12-06
  • 招待講演
• [学会発表] 先天性縮毛症・乏毛症 (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉浦一充
  • 学会等名: 第20回日本臨床毛髪学会学術集会
  • 発表場所: 総合あいしんセンター 高知県高知市
  • 年月日: 2015-12-05
  • 招待講演
• [学会発表] 膿疱症 (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉浦一充
  • 学会等名: 平成27年度日本皮膚科学会研修講習会（必須Aコース）
  • 発表場所: 学術総合センター 東京都千代田区
  • 年月日: 2015-08-29
  • 招待講演
• [学会発表] 膿疱性乾癬とAGEPの関係 (2015)
  • 著者名/発表者名: 杉浦一充
  • 学会等名: 第114回日本皮膚科学会総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜 神奈川県横浜市
  • 年月日: 2015-05-30
  • 招待講演
• [産業財産権] 関節症性乾癬モデル動物及び膿疱性乾癬モデル動物 (2015)
  • 発明者名: 秋山真志、杉浦一充、柴田章貴
  • 権利者名: 名古屋大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2015-181223
  • 出願年月日: 2015-09-14
• [産業財産権] インターロイキン36受容体アンタゴニスと欠損症の治療薬 (2015)
  • 発明者名: 秋山真志、杉浦一充、柴田章貴
  • 権利者名: 名古屋大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2015-254560
  • 出願年月日: 2015-12-25