| 研究課題/領域番号 |
15K15483
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
武冨 紹信 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70363364)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | 肝移植 / マウス / B型肝炎ウイルス / 再感染 / siRNA |
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| 研究実績の概要 |
肝移植において重要な課題の一つとして、肝グラフトへのヒトB 型肝炎ウイルス(HBV)の再感染がある。本研究では、HBV ゲノムおよびHBVレセプターをターゲットとしたsiRNAを体外灌流装置を介してグラフトに移植前に導入し、肝グラフトにHBV 再感染抵抗性を獲得させる新規治療法の開発を目的としている。
平成27年度研究実績として、
１、肝炎ウイルス感染動物の作成が可能であり、かつ肝臓へのsiRNA 導入が可能なのはマウスのみであるため、動物実験系としてのマウス肝移植モデルを確立した。
２、前実験として、siRNA をin vivo 導入したドナーから摘出した肝臓グラフトをレシピエントマウスに移植するドナーノックダウン-マウス肝移植モデルを確立し、移植後のレシピエント体内でのRNA 干渉作用の発現を確認した。
３、siRNA体外導入モデルの確立に向けた検討を行っている。肝グラフトに流入路カテーテルと流出路カテーテルを挿入し、リザーバーブを含む半閉鎖型灌流回路作成。灌流回路には、気液コンタクターを用いた酸素化モジュールが組み込まれており酸素化灌流を可能とし、グラフト保存容器および灌流回路の大部分を温度制御装置に埋め込むことで、室温環境下で任意の保存温度に設定可能した。この体外灌流装置を用いれば、マウス肝臓を任意の温度で長時間の酸素化灌流することが可能となり、siRNAなどの遺伝子導入の至適条件の検討が可能となった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
１、研究計画では平成27年度内にヒト肝細胞キメラマウスにおける肝移植モデルの確立を予定していた。上記研究実績の欄で記述したように、マウス肝移植モデルの確立はできたものの、非常に微細な手術手技を伴うモデル系であるため、安定的な手技を確立するのに時間を要した。そのため、重度免疫不全肝障害マウス（uPA/SCID マウス）にヒト肝細胞を移植することにより作成されるPXB マウスにおいて許容される範囲の侵襲レベルで完遂可能なマウス肝移植手術を確立するには至っていない。
２、siRNA体外導入モデルの確立：肝グラフトへの遺伝子導入を行うマウス肝体外灌流装置は確立したものの、siRNA導入には温度および酸素化管理が重要であることが判明したため、これらを調整できる灌流装置を作成することが必要となった。
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| 今後の研究の推進方策 |
１、PXBマウスを用いた肝移植モデルの確立：すでに確立した通常マウスの肝移植モデルと同じ手技的を用いる。ただし、ヒト肝細胞を移植したマウスであり肝臓の強度などに差異があることが予想される。より慎重な手術手技を用い安定したモデル系の確立を行う予定である。
２、siRNA体外導入モデルの確立：平成27年度中にマウス肝に対する温度および酸素濃度調整可能な体外灌流装置の作成は終了した。この装置を使用し、平成28年度にsiRNA遺伝子導入の至適条件の検討を行う。灌流液に治療用siRNA とInvivofectamine2.0 の複合体を混入し、15～25℃で60～120 分間の非冷温機械灌流をかける事により、治療用siRNA の体外導入の至適条件の検討を行う予定である。
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