| 研究課題/領域番号 |
15K15502
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
盛 真一郎 鹿児島大学, 医歯学域医学部・歯学部附属病院, 助教 (00620519)
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| 研究分担者 |
奥村 浩 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 客員研究員 (10398282)
前村 公成 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 准教授 (30398292)
喜多 芳昭 鹿児島大学, 医歯学域医学部・歯学部附属病院, 助教 (30570692)
馬場 研二 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 医員 (30642615)
夏越 祥次 鹿児島大学, 医歯学域医学系, 教授 (70237577)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | エクソソーム / 大腸癌幹細胞 / EMT / miRNA / ナノ磁気ビーズ |
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| 研究実績の概要 |
①HCT116，HCT15，COLO201，COLO205の大腸癌細胞株を購入し，培養を行った．培養細胞の上澄み液を回収し，フィルターを使用し，エクソソームを回収し，内包されているタンパク質を解析した．⇒結果，タンパク質が抽出され，エクソソームが回収できることを確認した．
②多摩川精機株式会社の受託サービスに依頼し，FGビーズにエクソソームの表面膜たんぱく質であるCD9，CD63，CD147の3種類のリガンドの固定化を行った．
③FGビーズに固定化されたCD9，CD63，CD147の3種類を使用し，エクソソームの回収が可能か実験した．正常のマーカーであるCD9を固定化したFGビーズで，HCT116を培養した上澄みからエクソソーム回収実験をしたところ，タンパク質およびCD9がウェスタンブロットで確認できた．同様に，癌のエクソソームマーカーであるCD63を固定化したFGビーズで，HCT116を培養した上澄みからエクソソーム回収実験をしたところ，タンパク質もCD63もウェスタンブロットで確認できなかった．これは，リガンドとしてのCD63が不適切であった可能性が考えられた．癌のエクソソームマーカーである,CD147を固定化したFGビーズで，同様の実験をしたところ，タンパク質およびCD147がウェスタンブロットで確認できた．免疫沈降反応を利用し，エクソソームが効率よく回収されることが示唆された．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
大腸癌細胞の培養を行い，エクソソームを確認し，FGビーズにCD9，CD63，CD147の3種類のリガンドの固定化を行った．おおむね順調に進展している．しかし，電子顕微鏡でのエクソソームの確認が出来ておらず，次年度の課題となった．
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| 今後の研究の推進方策 |
①CD9，CD63，CD147の3種類のリガンドの固定化したビーズを用い，大腸癌細胞株の上澄みより特定のエクソソームの抽出と解析を行う．
②電子顕微鏡によりエクソソームの確認を行う．
③大腸癌幹細胞マーカーであるLGR5，CD133，CD44，CD166，CD24，CD26のリガンドをビーズに固定化し，特定のエクソソームを検出し解析する．
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