| 研究課題/領域番号 |
15K15593
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| 研究機関 | 秋田大学 |
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研究代表者 |
熊澤 由紀代 秋田大学, 医学部, 講師 (70400504)
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| 研究分担者 |
熊谷 仁 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (60333936) [辞退]
佐藤 亘 秋田大学, 医学部, 助教 (10726441)
椛嶋 克哉 秋田大学, 医学部, 技術系補佐員 (30615422) [辞退]
佐藤 恵美子 秋田大学, 医学(系)研究科(研究院), 技術系補佐員 (00638273) [辞退]
白澤 弘光 秋田大学, 医学部, 医員 (60598019)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | 顕微授精 / センダイウィルス / 膜融合 |
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| 研究実績の概要 |
現行の顕微授精(卵細胞質内精子直接注入法, Intracytoplasmic sperm injection: ICSI)は精子注入時の卵子の紡錘体の損傷・細胞骨格の破壊等が指摘されている。近年の生殖医療において、挙児希望女性の高年齢化に伴う卵子の質の低下は大きな問題であり、より卵子へのダメージの少ない顕微授精技術の改善が望まれる。また、生殖医療においてICSIによる受精率、変性率、胚発育には、少なからず技術者間の差が認められ、より平易な臨床技術の開発および標準化は、依然として望まれる。顕微授精により卵子が最もダメージを受けるプロセスは、卵細胞膜の穿破と細胞質の吸引である。この卵子内への精子導入工程の自動化、すなわち卵子と精子の人為的膜融合が可能となれば、卵子へのダメージの軽減および技術者間の差の最小化が期待される。
本研究では、次世代の顕微授精法の実現に向け、卵子内への精子の導入を自動化する卵細胞膜穿破を介さない新規顕微授精法の確立を目的とし、マウスをモデルとして不活化センダイウイルスを用いた精子・卵子の膜融合による受精実験を実施した。
融合至適条件確立のため、精子の前処理(先体反応誘起による先体外膜の除去、融合培養液による精子内カルシウム濃度の上昇)の検討を実施中である。
現在までのところ精子と卵子の膜融合に至っていない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
現在までのところ卵子と精子の膜融合の成立に至っていない。先体外膜除去を目的とし、カルシウムイオノフォアを用いて先体反応の人為的誘起を行った。しかし先体反応により先体内膜を露出させた精子を用いた融合実験によっても卵細胞質との融合は成立せず、膜構造の異なる細胞間の融合が難航している。
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| 今後の研究の推進方策 |
膜融合の成立に対し、細胞内カルシウム濃度の上昇に次ぐ細胞内pHの上昇がアクチン重合のトリガーとして考えられる。融合培養液のカルシウム濃度、卵細胞質および精子内へのカルシウム導入の検討を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究計画の進捗状況の遅れにより、胚培養関連の試薬および消耗品の購入想定費用に余りが生じた。
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| 次年度使用額の使用計画 |
学会参加等情報収集を行い、膜融合の確立に続き、研究計画通り胚培養及び解析を進める。
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