遺伝性網膜疾患カニクイザルの作製とその病理学的解析

2015 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K15641
• 研究機関: 独立行政法人国立病院機構（東京医療センター臨床研究センター）
• 研究代表者: 岩田 岳 独立行政法人国立病院機構(東京医療センター臨床研究センター), 分子細胞生物学研究部, 部長 (90374157)
• 研究分担者: 下澤 律浩 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所, 霊長類医科学研究センター, 研究員 (50300786) ; 溝田 淳 帝京大学, 医学部, 教授 (10239262)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2016-03-31
• キーワード: 霊長類 / カニクイザル / CRISPR/Cas9 / ノックアウト / 遺伝子改変 / 疾患モデル動物

研究実績の概要

カニクイザルはヒトと同じ眼球構造を持つ貴重な実験動物である。このサル種に対し、CRISPR/Cas9システムを利用して遺伝性網膜疾患個体を作成し、その病態を明らかにすることを目的とした。従来の受精卵の作出に加え、GnRHアンタゴニストを投与する新たな卵胞発育刺激誘起法を用いて採取した卵は、顕微授精によって受精卵を作成できること、さらにCRISPR/Cas9プラスミドを前核に注入しても正常に卵割し、発生が進行することを確認した。また、受精卵培養には従来牛血清添加CMRL-1066培地を使用していたが、牛血清のロット差による培養成績への影響が危惧される。均一な成績を得ることを目的に成分が明らかな完全合成培地を用いたところ、胚盤胞への発生を確認することができた。卵の採取および受精卵の培養のような基盤的技術の改善が確認できた。そして、CRISPR/Cas9プラスミド注入受精卵を仮親に胚移植したところ、妊娠が得られたものの流産した。受胎産物を回収することができなかったために、遺伝子変異を確認することはできなかった。流産の要因は、受精卵の質、胚移植後の母体の状況、その他多くの要因が考えられる。CRISPR/Cas9プラスミドによる受精卵への負の影響も考えられることから、全く新たに構築したRNAタイプのCRISPR/Cas9を用意した。受精卵への応用を行う前に、カニクイザル体細胞を用いた検討を行っている。

研究成果

• [雑誌論文] HTRA1 Overexpression Induces the Exudative Form of Age-related Macular Degeneration. (2015)
  • 著者名/発表者名: Iejima D, Nakayama M, Iwata T
  • 雑誌名: Nova Science Publishers 巻: 10 ページ: 193-203
  • 査読あり
• [雑誌論文] Congenital Achromatopsia and Macular Atrophy Caused by a Novel Recessive PDE6C Mutation (p.E591K). (2015)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Hayashi T, Yoshitake K, Sergeev Y, Akahori M, Furuno M, Nishino J, Ikeo K, Tsunoda K, Tsuneoka H, Iwata T.
  • 雑誌名: Ophthalmic Genet 巻: 36 ページ: 137-144
  • DOI: 10.3109/13816810.2014.991932.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association of Retinal Artery and Other Inner Retinal Structures With Distribution of Tapetal-like Reflex in Oguchi's Disease. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kato Y, Tsunoda K, Fujinami K, Iwata T, Saga M, Oguchi Y.
  • 雑誌名: Invest Ophthalmol Vis Sci. 巻: 56 ページ: 2162-2172
  • DOI: 10.1167/iovs.14-16198.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Author Response: Postnatal Overexpression of the Human ARMS2 Gene Does Not Induce Abnormalities in Retina and Choroid in Transgenic Mouse Models. (2015)
  • 著者名/発表者名: Iwata T.
  • 雑誌名: Invest Ophthalmol Vis Sci. 巻: 56 ページ: 1389
  • DOI: 10.1167/iovs.14-16174.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reduced rod electroretinograms in carrier parents of two Japanese siblings with autosomal recessive retinitis pigmentosa associated with PDE6B gene mutations. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kuniyoshi K, Sakuramoto H, Yoshitake K, Ikeo K, Furuno M, Tsunoda K, Kusaka S, Shimomura Y, Iwata T.
  • 雑誌名: Doc Ophthalmol. 巻: 131 ページ: 71-79
  • DOI: 10.1007/s10633-015-9497-7.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathologic Changes of Cone Photoreceptors in Eyes With Occult Macular Dystrophy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Nakanishi A, Ueno S, Kawano K, Ito Y, Kominami T, Yasuda S, Kondo M, Tsunoda K, Iwata T, Terasaki H.
  • 雑誌名: Invest Ophthalmol Vis Sci. 巻: 56 ページ: 7243-7249
  • DOI: 10.1167/iovs.15-16742.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutation analysis of BEST1 in Japanese patients with Best's vitelliform macular dystrophy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Katagiri S, Hayashi T, Ohkuma Y, Sekiryu T, Takeuchi T, Gekka T, Kondo M, Iwata T, Tsuneoka H.
  • 雑誌名: Br J Ophthalmol. 巻: 99 ページ: 1577-1582
  • DOI: 10.1136/bjophthalmol-2015-306830.
  • 査読あり