2017 年度実績報告書

マウス進行性難聴発症に作用する機能ゲノム多型の同定

研究課題

研究課題/領域番号	15K18393
研究機関	公益財団法人東京都医学総合研究所
研究代表者	関優太公益財団法人東京都医学総合研究所, ゲノム医科学研究分野, 研究員 (10615636)
研究期間 (年度)	2015-04-01 – 2018-03-31
キーワード	ミオシンVI / 難聴 / 実験動物学 / 遺伝学 / モデルマウス / 機能ゲノム多型 / ヒト変異模倣マウス
研究実績の概要	ミオシンVI（Myo6）突然変異は優性の進行性難聴の発症原因となる。これまで本研究では、Myo6-ksvヘテロマウスが生じる進行性難聴はミスセンス変異（p.Glu461Lys）の優性効果に加え、カドヘリン23多型の効果により表現型が重篤化することを明らかにした。本年度は、第二の目的であったヒト優性難聴発症の原因となる変異部位（p.Cys442Tyr）を模倣したモデルマウスを樹立し、その変異効果を検証した。 MYO6-p.Cys442TyrマウスはCRISPR/Cas9システムを介して作製し、変異アレルホモおよび野生型/変異アレルヘテロ個体の聴力に関わる表現型を調査した。2ヵ月齢のホモ接合体の聴力レベルを聴性脳幹刺激反応（ABR）の測定によって調査した結果、ホモ接合体は測定した4, 8, 16および32 kHzのすべての周波数音で重度難聴を発症し、歪成分耳音響放射（DPOAE）もほぼ検出されなかった。また、同月齢のヘテロ接合体は4および32 kHz の周波数音のABRにおいて中等度および高度難聴が示唆され、DPOAEも野生型と比べ有意に低下していた。次に、有毛細胞の表現型を観察した結果、ホモ・ヘテロ個体にはともに外有毛細胞の部分的な脱落が検出され、ホモ個体では感覚毛融合も認められた。さらに、MYO6の有毛細胞における局在を調査した結果、ホモ・ヘテロともに異常局在が認められたことから、本研究の結果は、先行研究のキネティクス解析により示唆されているMYO6-p.Cys442Tyr変異によるミオシンモーター機能の低下を支持するものとなった。