| 研究課題/領域番号 |
15K18416
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
ワリ ナディラ 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (90751868)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | CAFs / Notchシグナル / TGF-bシグナル |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、癌微小環境の主要な構成細胞である癌内繊維芽細胞（carcinoma-associated fibroblasts; CAFs）が発生や器官形成において上皮-間質細胞の相互作用に重要な役割を演じているNotchシグナルを介して、癌微小環境を活性化し乳癌を悪性化する分子機構を明らかにする。申請者のグループで樹立されたヒト乳癌由来のCAFsは対照のヒト正常乳腺由来線維芽細胞と比較して、NotchリガンドJag1とNotchターゲットHes1とHes4の発現が著明に亢進していた。また、Notch受容体であるNotch3の発現が中等度上昇していた。この結果より、シグナルを送るCAFに発現しているJag1が、シグナルを受け取るCAFに発現しているNotch3を活性化し、Notchシグナルを誘導していることが推測された。また、シグナルを受け取ったCAFもJag1を発現し、Notch3活性化を介してシグナルを送ったCAFにNotchシグナルを誘導する。つまり、CAF間で相互的なJag1-Notch3を介したNotchシグナルの活性化が起こっていると予測される。また、この恒常的なNotchシグナルの活性化が、CAFsの活性化線維芽細胞能や癌促進能を媒介していると想像される。
Jag1やNotch3の発現がshRNAにより抑制された場合、CAFsにおけるNotchシグナルが抑制され、Notch intracellular domain3 (NICD)3やHes1蛋白の発現抑制や活性化線維芽細胞のマーカーであるa-smooth muscle actin (a-SMA)の発現やTGF-bシグナルの抑制が観察された。一方、Jag1やNotch3を過剰発現した乳腺由来線維芽細胞においてa-SMAの発現やTGF-bシグナルの亢進が観察された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
NICD3の強制発現をしたヒト乳腺由来線維芽細胞において、NOTCH signal およびTGF-b signal の亢進がられた。しかしながら、再現性をとるために同様の実験を再度施行したら、導入された細胞の増殖が抑制されて、過剰発現した細胞の樹立が困難になった。
その原因追及とトラブルシューティングに時間を要した。
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| 今後の研究の推進方策 |
ヒト乳腺由来線維芽細胞にNICD3やJag1を強制発現させた後に、ヒト乳癌細胞と免疫不全マウスの皮下に共移植を施行した。しかしながら、各群で明らかな癌の増殖の差は観察されなかった。
今後は、移植する細胞数の検討および、CAFsで亢進したNotch signalを抑制する系を用いて、stromal Notch signal の癌増殖・進展に関する役割について考察する予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
前述したように、Notch signalを亢進させた細胞の安定性の問題や、in vivo mouse modelを使用した実験における条件検討に時間を要したため。
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