研究課題
T細胞は獲得免疫の要であるが、T細胞の発生及び活性化にはTCRシグナルが不可欠である。しかし、その分子作用メカニズムについては不明な点が多い。申請者はこれまで、アクチン重合因子mDia1/3二重欠損マウスを用いることにより、TCRシグナルにはmDiaが促進的に働くことを見い出してきた。本研究では、さらにmDia DKOのT前駆細胞や末梢T細胞を用いて、TCRシグナル伝達におけるmDiaの分子作用機序を解析し、TCRシグナル伝達を分子レベルで包括的に理解することを目指した。昨年度までは、抗原提示細胞に模した脂質二重膜を用いて、T前駆細胞のTCR刺激を行い、全反射顕微鏡によるTCRマイクロクラスターの分子イメージングを行った。その結果、mDia1/3の二重欠損はTCR刺激依存的TCRマイクロクラスターの形成に影響しないものの、その動きを阻害することが分かった。さらに、F-actinの蛍光標識であるEGFP-lifeactを細胞に導入し、TCRマイクロクラスターと同時イメージングを行った結果、コントロール細胞で見られるTCRミクロクラスターとF-actinの連動が著しく阻害されていることを見いだした。本年度はさらに、Tamoxifen誘導による時期特異的遺伝子欠損システムの確立に成功し、それを用いた成熟末梢T細胞におけるmDiaの機能解析を行った。さらには、EGFPmDia3を発現させたT細胞を用いて、TCR刺激依存的なmDia3動態を可視化し、mDiaが細胞内においてどこに局在し、どのようにF-actinと相互作用するのを明らかにした。以上のことから、mDiaは細胞骨格アクチンを介してTCRシグナルに関わっていることが明らかになった。
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すべて 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件、 オープンアクセス 1件) 学会発表 (4件)
EMBO Molecular Medicine
巻: 8 ページ: 1310-1324
1015252/emmm.201606609
