| 研究課題/領域番号 |
15K18991
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| 研究機関 | 宮崎大学 |
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研究代表者 |
根本 隆行 宮崎大学, 医学部, 助教 (90506833)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | インスリン / C57BL/6マウス |
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| 研究実績の概要 |
本研究は脳由来インスリンの神経生理学機能の網羅的解析を目的とするものである。当該年度は、解析に使用するC57BL/6マウス脳内でインスリンが産生されているか否かを確認するために、C57BL/6マウスの脳を採取し、insulin mRNAとinsulin 前駆体（Proinsulin）の発現解析を行った。げっ歯類には２つのインスリン遺伝子Ins1およびIns2があり、とりわけ脳にはinsulin2のみ発現していることが知られている。以上の点をふまえ以下の解析をおこなった。
C57BL/6マウス脳よりRNAを採取し、Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction（RT-PCR）によりinsulin2 mRNAの発現解析を行った。RT-PCRの際、使用したプライマーは先行論文で使用されたものと研究代表者らが独自で設計したものを使用した（Mehran et al. Cell Metabolism 2012）。いずれのプライマーもイントロンを挟むエキソン２からエキソン３をコードするもの（106bp、167bp）である。ポジティブコントロールとして、insulin2を構成的に発現している膵臓および胸腺より採取したRNAを使用した（Fan et al. EMBO J 2009）。RT-PCRの結果、C57BL/6脳内でもinsulin2 mRNAが発現していることが示唆された。
次にC57BL/6マウス脳より総蛋白質を採取し、Western blottingによりproinsulinの発現解析を行った。Western blottingの結果、C57BL/6脳内でもproinsulin蛋白質が発現していることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
脳由来インスリンの神経生理学機能解析に使用するC57BL/6マウスにおいて、insulin2の発現を示唆する結果を得ることができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
C57BL/6マウスを使用した脳由来インスリンの神経生理学機能解析にあたり、脳内におけるインスリン産生細胞の特定を計る予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当該年度、解析に使用するC57BL/6マウスの繁殖が順調にいかなかったため、その後の解析に要する費用の支出が発生しなかった。
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| 次年度使用額の使用計画 |
脳内におけるインスリン産生細胞の特定と脳由来インスリンの神経生理学機能解析に全額使用する予定である。
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