本研究は筋萎縮性側索硬化症の病態機序解明を目的とする.我々はALSのkey molecule である TDP-43の機能から,ALS罹患組織におけるRNA代謝の異常に焦点をあて研究を進めている.既にALS罹患組織における,複数のmRNAのスプライシング異常およびスプライシング異常の原因となる U snRNAs およびGEM小体の減少を見出し,学術誌に報告を行っている. 本研究では介在ニューロンの機能異常に注目し,そのRNA代謝の検討を目的とした.それに先駆けて,iPS細胞技術を用いて,同細胞由来の運動神経細胞を作成し,運動神経マーカーの発現を確認した.また脊髄でのホルマリン固定パラフィン包埋組織(FFPE)からのmRNAの回収,およびその定量についての検討を行った.同検体ではmRNAの断片化が生じており,定量に際し増幅産物サイズに留意する必要がある事を見出した. さらに運動神経変性に関連しうるスプライシング変化として,stasimon mRNA に注目し解析を行った.これはALSと同様の運動ニューロン疾患である,脊髄性筋萎縮症モデル動物において,介在ニューロンを介した下位運動ニューロン変性の原因として報告されている.われわれの検討では,同スプライシング変異は,TDP-43発現抑制ヒト培養細胞において確認されたが,ALS脊髄由来mRNAでは変化は確認されなかった. 今後の課題としては,介在ニューロンの障害がALS病態に与える影響をより直接的に証明する必要がある.動物モデルなどを用いた解析や,介在ニューロンの障害を起こす遺伝子の絞り込みなどが必要となる.
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