細胞内シグナル伝達分子JAK2の変異特異的に活性化される転写因子の機能解析

2015 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 15K19559
• 研究機関: 順天堂大学
• 研究代表者: 枝廣 陽子 順天堂大学, 医学部, 助教 (40732863)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: JAK2V617F / 骨髄増殖性腫瘍

研究実績の概要

骨髄増殖性腫瘍は、造血幹細胞の異常によって、骨髄系細胞のクローナルな増殖をおこす疾患であり、代表的な3疾患である真性赤血球増加症、本態性血小板血症、原発性骨髄線維症の患者の多くが、JAK2V617F変異を有することが分かっている。これまでにJAK2阻害薬の臨床応用が行われているが、野生型のJAK2も阻害するため副作用が多く、新たな治療戦略が求められている。これまでに、申請者はJAK2V617F特異的に活性化される転写因子の存在を明らかにしており、本研究ではJAK2V617F変異特異的な新規治療薬の開発を目的とした。
平成27年度は、順天堂医院血液内科に通院中の患者の瀉血検体からJAK2V617F変異の定量を行なうとともに、CD34陽性細胞を抽出し収集し、in vitroでこの転写因子の役割の解析を行なった。得られた患者検体からRNAを抽出し、この転写因子の定量化の条件検討を行うとともに、コントロール検体の検討を行った。
また、この転写因子を用いたレポーターアッセイ系を構築し、JAK2阻害薬を用いてその高い感受性を確認した。
さらに、この転写因子の標的遺伝子を明らかにするために、JAK2V617Fを誘導する細胞株を新たにつくり、マイクロアレイ法によりAIM2、IL1B、CASP1などの遺伝子がJAK2V617Fにより誘導されることを示し、Experimental Hematology and Oncologyに報告した。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

平成27年度の目標は、JAK2V617F特異的な転写因子のin vivoおよびin vitroでの役割の解明であった。in vitroでの解析は現在も進行中であるが、平成28年度の目標であった分解阻害のメカニズムの解明を今年度行なうことができ、また新たにレポーターアッセイによる薬剤スクリーニングシステムの構築も行なうことができたため、おおむね順調に進展していると考える。

今後の研究の推進方策

JAK2V617F特異的な転写因子の標的遺伝子を明らかにし、細胞の腫瘍化のメカニズムを明らかにしていく。

研究成果

• [雑誌論文] Activation of the thrombopoietin receptor by mutant calreticulin in CALR-mutant myeloproliferative neoplasms. (2016)
  • 著者名/発表者名: Araki M, Yang Y, Masubuchi N, Hironaka Y, Takei H, Morishita S, Mizukami Y, Kan S, Shirane S, Edahiro Y, Sunami Y, Ohsaka A, Komatsu N
  • 雑誌名: Blood 巻: 127 ページ: 1307-1316
  • DOI: 10.1182/blood-2015-09-671172
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of AIM2 as a downstream target of JAK2V617F. (2016)
  • 著者名/発表者名: Liew EL, Araki M, Hironaka Y, Mori S, Tan TZ, Morishita S, Edahiro Y, Ohsaka A, Komatsu N
  • 雑誌名: Experimental Hematology & Oncology 巻: 5 ページ: 2
  • DOI: 10.1186/s40164-016-0032-7
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Application of genetic data to clinical practice of MPN. (2015)
  • 著者名/発表者名: Edahiro Y
  • 雑誌名: Rinsho Ketsueki 巻: 56 ページ: 949-955
  • DOI: 10.11406/rinketsu.56.949
• [雑誌論文] Current problems in the diagnosis of Philadelphia-negative myeloproliferative neoplasms in Japan. (2015)
  • 著者名/発表者名: Shirane S, Araki M, Morishita S, Edahiro Y, Ohsaka A, Komatsu N.
  • 雑誌名: Rinsho Ketsueki 巻: 56 ページ: 877-882
  • DOI: 10.11406/rinketsu.56.877
  • 査読あり
• [学会発表] Activation of AP-1 by JAK2V617F through induction and stabilization of c-Fos (2015)
  • 著者名/発表者名: Edahiro Y, Araki M, Hironaka Y, Yang Y, Morishita Y, Sunami Y, Ohsaka A, Komatsu N
  • 学会等名: 57th Annual Meeting of the American Society of Hematology
  • 発表場所: Orlando FL, USA
  • 年月日: 2015-12-05 – 2015-12-08
  • 国際学会
• [学会発表] A highly specific method for detecting a single copy JAK2V617F mutation (2015)
  • 著者名/発表者名: Morishita S, Araki M, Hironaka Y, Sunami Y, Edahiro Y, Tsutsui M, Ohsaka A, Komatsu N
  • 学会等名: 第77回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 金沢、石川県、日本
  • 年月日: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [学会発表] Early disease onset of patients with triple-negative myeloproliferative neoplasms (2015)
  • 著者名/発表者名: Shirane S, Araki M, Morishita S, Edahiro Y, Takei H, Tsumura M, Hironaka Y, Ochiai T, Misawa K, Ohsaka A, Komatsu N
  • 学会等名: 第77回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 金沢、石川県、日本
  • 年月日: 2015-10-16 – 2015-10-18
• [学会発表] Establishment of iPS cells from myeloproliferative neoplasms patients with CALR mutation. (2015)
  • 著者名/発表者名: Takei H, Morishita S, Araki M, Mizukami Y, Edahiro Y, Sunami Y, Hironaka Y, Tsumura M, Tsuneda S, Endo H, Nakamura S, Eto K, Ohsaka A, Komatsu N.
  • 学会等名: 第77回日本血液学会学術集会
  • 発表場所: 金沢、石川県、日本
  • 年月日: 2015-10-16 – 2015-10-18