| 研究課題/領域番号 |
15K19611
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
長谷川 泰浩 大阪大学, 医学部附属病院, 特任助教 (10730369)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | SPRY2 / FGF19 / 小児胆汁うっ滞性疾患 / 胆道閉鎖症 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は当院倫理委員会の承認を受け、小児慢性胆汁うっ滞性疾患において最も多数を占める胆道閉鎖症患者及び、胆汁うっ滞の無い対照群として肝血管腫患者、OTC欠損症患者、肝芽腫患者の血清及び肝組織を用い、慢性胆汁うっ滞の状況下での胆汁酸代謝機構の解析を行っている。
27年度までに、胆汁うっ滞の状況下では本来胆汁酸産生制御において中心的な役割を果たすfibroblast growth factor (FGF)19が、生理的に発現する小腸上皮だけではなく、肝細胞からもmRNAレベルで発現することを定量PCR法、in situ hybridization法で見出した。さらに血清中及び肝組織中のFGF19は対照肝と比べて、有意に高値であった。FGF19は肝細胞膜上にあるFGF receptor (FGFR)4を活性化させた後に、ERK経路を活性化させ、胆汁酸合成の律速酵素であるCYP7A1を抑制し、胆汁酸合成を負に制御するが、われわれは胆道閉鎖症の肝臓ではFGFR4の下流にあるERK経路が、肝細胞でのSPRY2発現により阻害されていることをウエスタンブロット法及び免疫染色法で共に確認した。その結果としてCYP7A1 mRNAの発現量低下を定量PCR法で確認し、胆汁酸産生が適切に制御できないことを見出した。以上の知見を論文化し、投稿しているが、まだpublishには至っていない。
27年度はここまでの知見を踏まえ、SPRY2の発現がどういったシグナルにより誘導されるのかを確かめることを目的に、HepG2細胞を胆汁酸及びFGF19蛋白で処理し、胆道閉鎖症などの小児慢性胆汁うっ滞性疾患と同様の蛋白発現量プロファイルが得られる至適の条件を検索中であり、現在引き続き実験及びサンプリングを行い、基礎データを収集中である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
ヒト検体で得られた知見が、投稿し、査読に基づき修正を行っているが未だ論文化できていない。
またSPRY2の発現がどういった因子やシグナルによって誘導されるのかを確かめることを目的に、HepG2細胞を胆汁酸及びFGF19蛋白で処理し、胆道閉鎖症などの小児慢性胆汁うっ滞性疾患と同様の蛋白発現量プロファイルが得られる至適の条件を検索中であるが、生体と同様のプロファイルの傾向を再現させることに難渋している。
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| 今後の研究の推進方策 |
まずはヒト検体で得られた知見を再投稿し、論文化することを第一の目標とする。
また予定の遅れを挽回するために、生体と同じ傾向のプロファイルを完全に再現することだけではなく、幾つかのプロファイルを比較することで、得られる知見がある可能性があると考え、基礎データを収集していくことから、新たな因子を見出すことも検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞実験の至適条件の確定が遅れており、siRNAを用いたノックダウン実験及び、ノックアウトマウスを用いたマウス実験にかかる費用を使用していない。
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| 次年度使用額の使用計画 |
細胞実験及びsiRNAを用いたノックダウン実験、マウス実験に用いる。
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