| 研究課題/領域番号 |
15K19641
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
李 知子 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (10596042)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | Duchenne型筋ジストロフィー / リードスルー / ナンセンス変異 / ナンセンス変異依存性mRNA分解 |
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| 研究実績の概要 |
Duchennne型筋ジストロフィー（Duchenne muscular dystrophy: DMD）に対する根治的治療の一つとしてmRNA上のナンセンス変異を読み飛ばし、ジストロフィンを産生させるナンセンスリードスルー誘導治療の開発が進んでいる。しかし、生体にはナンセンス変異依存性mRNA分解（nonsense-mediated mRNA decay: NMD）機構が備わっているため、ナンセンス変異を有するDMD患者ではmRNAが分解され、そのことが治療効果の妨げになっている。本研究の目的は、ナンセンス変異を有するDMD患者においてNMDを制御し得ることを明らかにすることである。DMD筋培養細胞において検討を進めるために、27年度はDMD症例におけるナンセンス変異の同定を行なった。ジストロフィン遺伝子MLPA法によって欠失・重複変異を認めないDMD症例の血液細胞より抽出したDNAを用いて、次世代シークエンサーあるいはサンガー法により塩基配列の解析を行ない、ナンセンス変異の同定を行なった。また、細胞培養系のセットアップを行なった。これらの症例の筋培養細胞により検討を進める予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
本来であれば、ナンセンス変異を有する培養筋細胞を用いてジストロフィン遺伝子のmRNAの測定を行う予定であったが、現在は変異を同定し、細胞培養系のセットアップをおこなっている段階である。研究者の異動に伴って、遺伝子解析や細胞培養系の再確立に時間を要したために遅れている。
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| 今後の研究の推進方策 |
1）ナンセンス変異を有するDMD患者由来培養筋細胞および対照培養筋細胞におけるジストロフィンmRNAをreal time PCR法により定量し、NMDの影響を明らかにする。
2）caffeine、wortmannin、Pateamine A あるいはUPF1に対するRNAiなどを用いてNMDを制御することによりmRNA量が増加することを検証する。
3）DMD患者由来培養筋細胞におけるアルベカシンによるナンセンス変異リードスルー誘導治療に、NMD制御を導入し、ジストロフィン蛋白発現が増加することを検証する。
4）ナンセンス変異を有するDMDモデルマウスであるmdxマウスにおいて、ナンセンス変異リードスルー治療にNMD制御を導入し、その有効性を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
試薬を予定よりも安価に購入できたため
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| 次年度使用額の使用計画 |
次年度の試薬の購入などの研究費にあてる予定である
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