2016 年度実施状況報告書

骨肉腫肺転移に関するマイクロRNAの検討

研究課題

研究課題/領域番号	15K20009
研究機関	琉球大学
研究代表者	當銘保則琉球大学, 医学部附属病院, 特命講師 (20547369)
研究期間 (年度)	2015-04-01 – 2018-03-31
キーワード	miRNA / 骨肉腫 / 肺転移
研究実績の概要	平成27年度はヒト骨肉腫細胞株143B（親株）とこれまで先行研究で樹立した143B-LM4（高肺転移株）の培養細胞株からマイクロRNAを含むトータルRNAを抽出し、マイクロRNAの発現を解析した。その結果、親株に比して高肺転移株でmir-143Bとmir-145が有意に高い発現を示していることを同定した。さらに抽出したトータルRNAを用いてマイクロアレイによるクラスター解析を行った結果、mir-143とmir-145に関連した下流のｍRNA、TANGLNとLASP1が上昇していることを確認した。その成果を第30回日本整形外科学会基礎学術集会で発表を行った。平成28年度は高肺転移株においてTANGLNおよびLASP1をsiRNAによるノックアウトあるいは形質導入による過剰発現を行い、mir-143とmir-145の発現量の解析を行っている段階である。今後はその成果を国内外の整形外科領域の学会で成果を公表する予定である。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由 siRNAの取り扱いやベクターを用いた遺伝子過剰発現の手技習得に時間を要している。
今後の研究の推進方策	高肺転移株においてTANGLNおよびLASP1をsiRNAによるノックアウトあるいは形質導入による過剰発現を行い、mir-143とmir-145の発現量の解析を行い解析する。また、親株と高肺転移株におけるマイクロRNAのクラスター解析を行い、mir-143やmir-145以外のマイクロRNAの発現にも着目して研究を進める予定である。
次年度使用額が生じた理由	購入した試薬類が予定より少額で済んだため。
次年度使用額の使用計画	手袋など実験用消耗品にあてる予定。