| 研究課題/領域番号 |
15K20135
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| 研究機関 | 山梨大学 |
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研究代表者 |
多賀谷 光 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (50418711)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 癌幹細胞 / ヒトパピローマウイルス / ゲノム編集 |
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| 研究実績の概要 |
癌幹細胞をターゲットとした治療法の検討において、HPV(ヒトパピローマウイルス)持続感染とホストゲノムへの組み込みが発癌の原因として明らかとなっている子宮頸癌を対象とすることに変更し、現在は血中のHPV遺伝子の検出レベルと病勢の進行程度、並びに再発マーカーとしての感度を標準化するために、real time PCRによるHPV遺伝子検出のための実験系の確立のための調整を行っている。また、HPVが感染した前癌状態 (CIN:cervical intraepithelial neoplasia)から浸潤癌までの臨床検体におけるHPV遺伝の発現レベルの検討と、ゲノム編集技術を用いたHPV遺伝子保有細胞における特定の発癌領域 (E6およびE7領域) の不活性化による子宮頸がん治療の可能性を模索するための準備をしている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
研究費申請当初に着装していた癌幹細胞に対する治療を再検討し、子宮頸癌細胞にしか存在しないHPV遺伝子を非常に感度の高い腫瘍マーカーとして利用することを目指しており、PCRの条件調整と再現性、cut offレベルの調整に難航している。また、ゲノム編集については、研究代表者が所属する研究室としては初の試みであり、施設内の先行研究者の指導を仰いでいるところにある。
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| 今後の研究の推進方策 |
HPV陽性が確認されている子宮頸癌患者の同意を得て、血中、病巣中のHPV遺伝子発現レベルの検討を行い、治療の経過に伴う変化を検討する。治療後のfollow up中にも血中レベルの推移を検討し、再発病巣が確認できるタイミングとの関係、偽陽性、偽陰性に関わる因子の検討をおこなう。
CRISPER/cas9システムを用いたゲノム編集により、HPV陽性子宮頸癌細胞株におけるE6あるいはE7領域ゲノムのコピー数の変化についての検討を行う。また、コピー数の変化が、腫瘍性性質 (細胞増殖能、浸潤能など)の変化に関与するか検討する。また、前癌病変～浸潤癌まで、臨床検体におけるE6あるいはE7領域ゲノムのコピー数を検討するとともに、生体でのゲノム編集の手法を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
PCRを用いたHPV遺伝子検出の詳細な検討を繰り返すため、また、ゲノム編集の実験系の確立のために、技術補佐員を導入したことでその人件費並びに試薬・消耗品にかかる費用が発生した。
今後は、ゲノム編集システムの具体的な運用のために、ガイドRNAやプライマーの調整を行うことを想定している。
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