| 研究課題/領域番号 |
15K21003
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
原 敏文 新潟大学, 医歯学系, 助教 (80456219)
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| 研究期間 (年度) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| キーワード | miRNA / HTLV-1 / ATL / 合成致死 |
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| 研究実績の概要 |
成人T細胞白血病(ATL)は、ヒトT細胞白血病ウイルス(HTLV-1)の感染が原因で発症するT細胞性白血病である。ATLは予後が極めて不良であるが、これまで根治治療薬は開発されていない。本研究は、ATLを選択的に致死誘導するmicroRNA(miRNA)を同定し、その作用機構を解明することで、科学的根拠に基づくATL治療法の確立を目指している。
平成27年度の研究実施計画に沿って以下の結果を得た。①正常ヒトT細胞およびHTLV-1の癌タンパクTaxを強制発現したヒトT細胞のmiRNAトランスクリプトームを解析し、T細胞腫瘍化に伴うmiRNAの発現変動を明らかにした。②ゲノムワイドshRNAライブラリーを用いて、Tax発現T細胞株とその親株(Tax非発現細胞)をスクリーニングし、ATL細胞細胞の増殖に関与する遺伝子群を明らかにした。これら遺伝子群を標的として作用するmiRNAをバイオインフォマティクスで予測解析し、ATL細胞の増殖に影響する候補miRNAを選定した。③miRNAの作用レベルをモニターするため、miRNAの相補的配列をルシフェレース遺伝子の3’-UTR領域に挿入したレポーターベクターを作製した。これらレポーターベクターが細胞内で作用することを確認した。④miRNA前駆体のヘアピン構造を含むゲノム領域をクローニングし、miRNA発現レンチウイルスベクターを作製した。これらウイルスをT細胞株に感染させて、細胞内でその発現レベルを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
バイオインフォマティクスを用いた複数の解析結果を統合したことにより、ATL細胞の増殖に影響するmiRNA候補群を高精度に選定できたと考えている。今回作製したレンチウイルスベクターを用いたmiRNA発現系は、リンパ球系細胞では十分なmiRNA発現量が得られない可能性があった。そこで、レンチウイルスベクターの改変およびmiRNA mimicを用いた強制発現系の構築を並行して進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成27年度の成果を基に、成人T細胞白血病に合成致死を誘導するmiRNAの同定を進める。現在候補となっているmiRNAをATL細胞株および非ATL細胞株に発現導入し、細胞増殖に対する影響を調べる。ATL細胞の増殖に影響するmiRNAを明らかにし、その作用分子機構について検討を進める予定である。
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