遺伝子操作系を用いたSFTSVの網羅的抗ウイルス薬検索とウイルス蛋白質の機能解析

2017 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 15K21645
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 谷口 怜 国立感染症研究所, ウイルス第一部, 研究員 (60734465)
• 研究期間 (年度): 2015-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: ミニゲノム法 / SFTSウイルス / ハートランドウイルス / リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス

研究実績の概要

昨年度まで同様、SFTSVの遺伝子操作系の構築を検討すると同時にSFTSVと遺伝的に近縁であるハートランドウイルス(HRTV)の遺伝子操作系の検討、および同じマイナス鎖アンビセンス遺伝子のリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)の遺伝子操作系の改良をおこなった。SFTSVおよびHRTVの感染性粒子を得ることはできなかった。LCMVはWE株、Armstrong株で作製を試み、感染性粒子を得ることに成功した。SFTSV、HRTVの感染性粒子を得ることができなかったため、抗ウイルス薬探索を中止し、構成蛋白質の機能解析を中心におこなった。SFTSVとHRTVの核蛋白質(N)はウイルスの転写複製に必須な蛋白質である。両株間でアミノ酸同一性は62%である。SFTSVのNはHRTVのLと共にウイルスゲノムの転写複製をおこなうことが可能であるが、HRTVのNはSFTSVのLとはウイルスゲノムの転写複製をおこなうことができないことを昨年度明らかにした。平成29年度ではSFTSVのN蛋白質のゲノム転写複製に必須な部位の同定を行った。その結果、SFTSVのNのα1-2ヘリックス領域(2-28AA)はNの多量体形成に重要であり、この多量体形成の有無がウイルスゲノムの転写複製効率へ影響を与える可能性が示唆された。また、Nの77-102AA領域はリボ核酸形成時ポリメラーゼ蛋白質の転写複製能へ影響を与える可能性があることが明らかとなった。
また、LCMVの遺伝子操作系に関しては、ウイルスゲノムの非翻訳領域へ変異を導入したWE株のウイルスを作製、マウスに接種する実験をおこなった。その結果、変異株の中から弱毒株が得られ、これらの弱毒株接種群に野生株を再接種したところ、防御に成功した。このことはLCMVのワクチン株作製の基盤研究につながる。

研究成果

• [雑誌論文] A neutralization assay with a severe fever with thrombocytopenia syndrome virus strain that makes plaques in inoculated cells. (2017)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Taniguchi, Aiko Fukuma, Hideki Tani, Shuetsu Fukushi, Masayuki Saijo, Masayuki Shimojima.
  • 雑誌名: Journal of Virological Methods 巻: 244 ページ: 4-10
  • DOI: 10.1016/j.jviromet.2017.01.005.
  • 査読あり
• [雑誌論文] First isolation and characterization of pteropine orthoreoviruses in fruit bats in the Philippines. (2017)
  • 著者名/発表者名: S Taniguchi, K Maeda, T Horimoto, J S. Masangkay, R Puentespina Jr., J Alvarez, E Eres, E Cosico, N Nagata, K Egawa, H Singh, A Fukuma, T Yoshikawa, H Tani, S Fukushi, S Tsuchiaka, T Omatsu, T Mizutani, Y Une, Y Yoshikawa, M Shimojima, MSaijo, S Kyuwa.
  • 雑誌名: Archives of Virology 巻: 162 ページ: 1529-1539
  • DOI: 10.1007/s00705-017-3251-2.
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] かりフォルニア脳炎オルソブニヤウイルス感染症 (2017)
  • 著者名/発表者名: 谷口 怜
  • 雑誌名: 化学療法の領域 巻: 33 ページ: 113-121
• [学会発表] Comparative analysis of viral replication and transcription function of Severe fever with thrombocytopenia virus and Heartland virus (2017)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Taniguchi, Masayuki Shimojima, Shuetsu Fukushi, Takeshi Kurosu, Hideki Tani, Tomoki Yoshikawa, Shigeru Morikawa, Fumihiro Kato, Takahiro Maeki, Shigeru Tajima, Chang-Kweng Lim, Masayuki Saijo
  • 学会等名: 第65回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] The protein kinase inhibitors inhibit entry of severe fever with thrombocytopenia syndrome virus in vitro (2017)
  • 著者名/発表者名: Hideki Tani, Hikaru Fujii, Satoshi Taniguchi, Shuetsu Fukushi, Takeshi Kurosu, Masayuki Shimojima, Shigeru Morikawa, Masayuki Saijo
  • 学会等名: 第65回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] A non-human primate model for severe fever with thrombocytopenia syndrome SFTS (2017)
  • 著者名/発表者名: Masayuki Shimojima, Satoshi Taniguchi, Yasushi Ami, Noriyo Nagata, Shuetsu Fukushi, Takeshi Kurosu, Shumpei Watanabe, Hideki Tani, Aiko Fukuma, Naoko Iwata-Yoshikawa, Masayuki Saijo
  • 学会等名: 第65回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] First Isolation and Characterization of Pteropine Orthoreoviruses in Fruit Bats in the Philippines (2017)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Taniguchi, Ken Maeda, Taisuke Horimoto, Joseph S Mansangkay, Roberto Puentespina Jr., Kazutaka Egawa, Shuetsu Fukushi, Yasuhiro Yoshikawa, Masayuki Shimojima, Masayuki Saijo, Shigeru Kyuwa
  • 学会等名: 7th International Congress of Virology International Union of Microbiological Societies 2017
  • 国際学会
• [学会発表] Analysis of the cross reactivity of flaviviruses with Japanese encephalitis patient’s sera showed the importance of neutralization test (2017)
  • 著者名/発表者名: Takahiro Maeki, Shigeru Tajima, Makiko Ikeda, Fumihiro Kato, Satoshi Taniguchi, Eri Nakayama, Chang-Kweng Lim, Tomohiko Takasaki, Masayuki Saijo
  • 学会等名: 第65回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] The Characterization of large and small plaque variants in Zika virus Chiba isolate ZIKV/Hu/S36/Chiba/2016 (2017)
  • 著者名/発表者名: Shigeru Tajima, Fumihiro Kato, Eri Nakayama, Yasuhiro Kawai, Kenichi Shibasaki, Masakatsu Taira, Satoshi Taniguchi, Takahiro Maeki, Chang-Kweng Lim, Tomohiko Takasaki, Masayuki Saijo
  • 学会等名: 第65回日本ウイルス学会学術集会