| 研究課題/領域番号 |
16017218
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
山本 友子 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (60110342)
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| 研究分担者 |
友安 俊文 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 助教授 (20323404)
高屋 明子 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 助手 (80334217)
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| キーワード | サルモネラ / マクロファージ / アポトーシス / 細胞内寄生菌 / 病原性 |
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| 研究概要 |
サルモネラは、マクロファージ内でファゴソームの成熟過程を変化させることにより特異的なvacuole (SCV)に成熟させ、その中で増殖する。本研究では、サルモネラの細胞内寄生性を多面的に制御する遺伝子を同定し、それらの遺伝子の破壊株を用いてSCV膜動輸送機構の解析を進め、細胞内寄生性を軸としたサルモネラの病原戦略を解明することを目的としている。本年度は以下の事柄を明らかにした。
ATP依存型プロテアーゼClpXP破壊株はマウスに対する病原性を失い、長期にわたり持続感染することを見出した。病原性の低下はマクロファージ内増殖能の低下に基づくものであった。破壊株ではSalmonella pathogeneicity Island 2にコードされるいくつかの蛋白質の産生量の低下に加え、最も顕著な変化として細胞表層画分にPagCが多量に含まれることを見出した。PagC増加の原因を明らかにするため、遺伝子発現ならびに蛋白の安定性の検討を行った。その結果、破壊株ではPagC蛋白の安定性が増加していることが明らかとなった。さらに、シグマ因子RpoSによりその転写が活性化される未知の蛋白質XがPagCの安定性を制御していることが明らかとなった。
PagCがOMV(outer membrane vesicle)として細胞外へ放出される仮説を立て、検証を行った。電子顕微鏡観察の結果、ClpXP破壊株およびPagC過剰生産株の培養上清には野生株に比べ大量のOMVが産生されていることが明らかとなった。さらに、サルモネラのOMVの主要な構成成分はPagCであり、OMVを介して何らかの蛋白質を細胞外へ輸送していると考えられた。ClpXP破壊株を感染させたマクロファージは、感染16時間後に菌体の周囲に大量のsmall vesicleを産生することを見出した。従ってマクロファージ細胞質へ放出されたOMVがサルモネラの病原レベルをコントロールする可能性を考えられた。
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