Toll様受容体を介したプライミング効果による脂質メディエーター産生増強機構

2004 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16017225
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 石井 聡 東京大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (10300815)
• キーワード: 血小板活性化因子 / PAF / アセチルCoA:リゾPAFアセチル転移酵素 / プライミング / TLR4 / MyD88 / TRIF

研究概要

アセチルCoA:リゾPAFアセチル転移酵素(リゾPAF-AT)は、血小板活性化因子(PAF)の産生にとって重要な生成反応を触媒する。腹腔マクロファージにおいて、この酵素はLPSによってプライミングされる。すなわちPAFで細胞を刺激してこの酵素の活性を上昇させるとき、LPSで前処理しておくと酵素活性の上昇がさらに増大する。申請者はこのプライミング効果がTLR4依存的かつMyD88非依存的に起きることを既に明らかにしているが、さらなる分子機構の解析を進めるために今年度は以下の実験を行った。
大阪大学審良教授より供与していただいたTRIF-KOマウスの腹腔マクロファージを用いた実験から、LPSのプライミング効果はTRIF非依存的に起きることが明らかになった。野生型マウスの腹腔マクロファージを用いた実験でIFNβはLPSの代わりにプライミング効果を惹起することはできず、また抗IFNβ抗体はLPSのプライミング効果を抑制できなかった。これらの結果はプライミング効果がTRIF非依存的現象であることを支持している。一方、シクロヘキシミド処理によりプライミング効果は大きく減弱したことからde novoのタンパク質合成の関与が示唆された。
上記のアプローチとは別に、リゾPAF-ATに対するLPSプライミング機構をこの酵素の部分アミノ酸配列を決定し、cDNAクローニングすることによって明らかにしようとする試みも行っている。ブタ脾臓のミクロソーム画分(ホモゲナイズ後に10,000×gで遠心した上清を、さらに100,000×gで遠心したときに得られる沈殿)から界面活性剤を使い酵素活性を可溶化後、数種類のカラムクロマトグラフィーによって部分的に精製した分画を既に得ている。現在、この分画を質量分析計で解析することによって部分アミノ酸配列を決定するための条件を検討中である。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of T cell death-associated gene 8 (TDAG8) as a novel acid sensing G-protein-coupled receptor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ishii, S., Kihara, Y., Shimizu, T.
  • 雑誌名: J.Biol.Chem. 280 ページ: 9083-9087
• [雑誌論文] Stimulation of erythrocyte ceramide formation by platelet activating factor. (2005)
  • 著者名/発表者名: Lang, P.A., Kempe, D.S., Tanneur, V., Eisele, K., Klarl, B.A., Myssina, S., Jendrossek, V., Ishii, S., Shimizu, T., Waidmann, M., Hessler, G., Huber, S.M., Lang, F., Wieder, T.
  • 雑誌名: J.Cell Sci. 118 ページ: 1233-1243
• [雑誌論文] Platelet activating factor receptor deficient mice have an improved host defense against pneumococcal pneumonia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Rijneveld, A.W., Weijer, S., Florquin, S., Speelman, P., Shimizu, T., Ishii, S., van der Poll, T.
  • 雑誌名: J.Infect.Dis. 189 ページ: 711-716
• [雑誌論文] Trophic signals acting via phosphatidylinositol-3 kinase are required for normal pre-implantation mouse embryo development. (2004)
  • 著者名/発表者名: Lu, P., Chandrakanthan, V., Cahana, A., Ishii, S., O'Neill, C.
  • 雑誌名: J.Cell Sci. 117 ページ: 1567-1576
• [雑誌論文] Platelet-activating factor receptor develops airway hyperresponsiveness independently of airway inflammation in a murine asthma model. (2004)
  • 著者名/発表者名: Ishii, S., Nagase, T., Shindou, H., Takizawa, H., Ouchi, Y., Shimizu, T.
  • 雑誌名: J.Immunol. 172 ページ: 7095-7102
• [雑誌論文] Absence of platelet-activating factor receptor protects mice from osteoporosis following ovariectomy. (2004)
  • 著者名/発表者名: Hikiji, H., Ishii, S., Shindou, H., Takato, T., Shimizu, T.
  • 雑誌名: J.Clin.Invest. 114 ページ: 85-93
• [雑誌論文] Dyslipidemia associated with atherosclerotic disease systemically alters dendritic cell mobilization. (2004)
  • 著者名/発表者名: Angeli, V, Llodra, J., Rong, J.X., Satoh, K, Ishii, S., Shimizu, T., Fisher, E.A., Randolph, G.J.
  • 雑誌名: Immunity 21 ページ: 561-574
• [雑誌論文] Platelet-activating factor receptor deficient mice show an unaltered clearance of Haemophilus influenzae from their respiratory tract. (2004)
  • 著者名/発表者名: Branger, J., Wieland, C.W., Florquin, S., Maris, N.A., Pater, J.M., Speelman, P., Shimizu, T., Ishii, S., van der Poll, T.
  • 雑誌名: Shock 22 ページ: 543-547