|
染色体の不安定性をふせぐために、細胞は様々なチェックポイント制御機構を備えており、紡錘体チェックポイント機構も近年注目を受けている。紡錘体チェックポイントに関与するタンパク質群は間期には細胞質や核膜に存在するが、M期の進行に伴いセントロメアに局在し、分裂中期から後期にかけて染色体から消失する。紡錘体が適正にセントロメアに結合していない染色体では消失しないことから、これらのタンパク質群はチェックポイントのセンサーと考えられる。我々はチェックポイント機構と染色体不安定性の関係を理解するために、スピンドルチェックポイントに関連したタンパク質複合体であるNuf2-Hec1に注目してその機能解析を行っている。本年度は、Nuf2-Hec1のタンパク質局在に関わるドメインの同定と、この複合体に結合するタンパク質の同定を目指した。Nuf2-Hec1は、S期には、セントロソームに局在しG2期から分裂期にセントロメアに局在することが明らかにされている。そこで、各種欠失変異コンストラクトを作成し、それぞれの局在に必須なドメインの同定を行った。次に、酵母の2ハイブリッド解析を用いてこの複合体に結合するタンパク質のスクリーニングを行った。その結果、Hec1は、セントロメアタンパク質であるCENP-Hと強く結合することが明らかになった。分裂期の抽出液を用いて、免疫沈降実験を行った結果、Nuf2複合体とCENP-Hは、動物細胞内においても結合していることが確認できた。さらに、CENP-H抗体の免疫沈降により、スピンドルチェックポイントタンパク質のMad2が共沈してきた。これらの結果を考えると、Nuf2-Hec1は、セントロメアにおいて、CENP-Hが存在するインナーセントロメアとMad2が存在するアウターセントロメアのコネクターとして機能している可能性が強く示唆された。
|
