研究課題
腸球菌Enterococcus faecalisの病因物質ゼラチナーゼの発現制御にかかわるペプチドフェロモンGBAPの生合成および輸送膜タンパク質FsrB、受容体膜タンパク質FsrC、および転写活性化因子FsrAについて、大腸菌Escherichia coliを宿主とする組換えタンパク質発現系を構築し、発現・精製・結晶化・X線結晶構造解析を進めている。フェロモン受容体膜タンパク質FsrCを大腸菌Escherichia coliを宿主として発現させることに成功し、培地1リットルあたり0.3mgの精製FsrCを得た。その後、結晶化条件探索の結果、ポリエチレングリコールを沈殿剤として柱状の微結晶(10x10x60μm^3)が得られた。この結晶は、Spring-8 BL41XUで9.3Å分解能まで回折した。その後、結晶化条件の最適化を進めており、現在までに10x20x150μm^3の結晶が得られている。今後も、結晶化条件の最適化を最優先して進め、高分解能の回折データ取得を目指す。研究分担者の中山二郎博士により合成されたGBAPを用いて、FsrCとGBAPの複合体についても結晶化実験を開始した。さて、FsrCの結晶化用試料の調製の際、精製FsrCを濃縮すると一部がSDS処理でも解離しない安定な2量体を形成することが明らかになった。γ-^<33>P-ATPを用いた自己リン酸化実験によりタンパク質に取り込まれた^<33>PはSDS-PAGEでFsrCの2量体に相当する位置に検出されたため、FsrCの自己リン酸化は、安定な2量体中、片方のサブユニットが他方のサブユニット中のヒスチジン側鎖をリン酸化することにより起こると推測している。
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