| 研究概要 |
前年度に引き続き、Oct-3/4・GFPトランスジェニックマウス胎子より樹立した胎子繊維芽細胞を用いて、Oct-3/4遺伝子の発現を誘導する天然物をスクリーニングした。すなわち、天然物を原形あるいは刻で購入し、ホモゲナイズ後、煮沸し、遠心して上清を採取した。ついで、凍結乾燥を行って粉末化し、使用直前まで冷蔵庫内に保存した。つぎに、それぞれの抽出物を10,1,0.1,0.01,0.001 mg/ml添加した培地で繊維芽細胞を7日間培養し、GFP観察用専用顕微鏡下で観察して、GFPを発現する細胞数と発現の強度を計測した。本年度新たに用いた生薬は、植物性、動物性ならびに鉱物性生薬中心とする350種である。自家蛍光を発する天然物が数種認められたが、それ以外に特異的に繊維芽細胞がGFPを発するように変化する天然物が3種(No.212,378,438)認められた。ついで、過剰排卵処置マウスから回収した前核期受精卵を用いて、胚盤胞への発生能ならびに得られた胚盤胞の細胞数に及ぼす天然物の影響を調べた。すなわち、培養細胞を用いた実験と同じ濃度の天然物抽出液を添加した胚培養液で4日間培養した。これまでのところ、処置胚は全く発生せず死滅するか、大差なく胚盤胞へ発生するかのどちらかであり、胚盤胞形成時期が遅れたり、形成せずに分裂を継続したり、あるいは細胞数が増加したりするような天然物は見いだされていない。現在、昨年度見いだされたNo.70ならびに本年度見いだした3種の生薬の前処置によって、細胞核の未分化能に関わる遺伝子の発現がみられるか否かをmRNAならびに蛋白質レベルで解析中である。
|
