エクトドメインシェディングの意義と分子メカニズムの解明

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16207014
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 目加田 英輔 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (20135742)
• 研究分担者: 岩本 亮 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (10213323) ; 水島 寛人 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30379094)
• キーワード: エクトドメインシェディング / HB-EGF / シグナル伝達

研究概要

エクトドメインシェディングとは、細胞膜蛋白質が細胞表面でプロテアーゼによる切断を受け、その細胞外ドメインが培養液中に放出される現象を言う。本研究の目的は、HB-EGFシェディング機構全容の解明にむけて、シェディングに関る分子群を明らかにし、シェディングの調節機構と生物学的意義の解明を行うことである。この目的のため、以下の実験を行った。HB-EGFを発現した細胞を用いて、siRNA法で切断を促進する遺伝子、抑制する遺伝子、のスクリーニングを行った。具体的には、レトロウィルスベクターにクローニングしたsiRNAライブラリーをHB-EGF発現細胞に感染させて、セレクションマーカーでセレクションの後、切断刺激を加えてもシェディングを起こさない細胞、あるいは反対に切断刺激を加えなくてもシェディングが起こっている細胞をcell sorterもしくはHB-EGF抗体結合磁気ビーズを用いて選別し、得られた細胞から、どの遺伝子が抑制されているかを明らかにし、エクトドメインシェディングに関わる遺伝子の同定を試みた。この結果明らかにエクトドメインシェディングが抑制されたと思われる細胞群を得ることができ、その細胞に含まれるsiRNAの同定を行った。これらの中には、細胞内シグナル伝達に関わる遺伝子、プロテアーゼの輸送や活性化に関わる遺伝子、に対するsiRNAが含まれていた。

研究成果

• [雑誌論文] Cytoplasmic Domain Phosphorylation of Heparin-Binding EGF-like Growth Factor. (2006)
  • 著者名/発表者名: Wang, X., Mizushima, H., Adachi, S., Oishi, M., Iwamoto, R., Mekada, E.
  • 雑誌名: Cell Struct.Funct. (in press.)
• [雑誌論文] HB-EGF promotes epithelial cell migration in eyelid development. (2005)
  • 著者名/発表者名: Mine, N., Iwamoto, R., Mekada, E.
  • 雑誌名: Development 132 ページ: 4317-4326
• [雑誌論文] Clinical significance of heparin-binding epidermal growth factor-Like growth factor in peritoneal fluid of ovarian cancer. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yagi, H., Miyamoto, S., Tanaka, Y., Sonoda, K., Kobayashi, H., Kishikawa, T., Iwamoto, R., Mekada, E., Nakano, H.
  • 雑誌名: Brit.J.Cancer 92 ページ: 1737-1745
• [雑誌論文] Heparin-binding EGF-like growth factor accelerates keratinocyte migration and skin wound healing. (2005)
  • 著者名/発表者名: Shirakata, Y., Kimura, K., Nanba, D., Iwamoto, R., Tokumaru, S., Morimoto, C., Yokota, K., Nakamura, M., Sayama, K., Mekada, E., Higashiyama, S., Hashimoto, K.
  • 雑誌名: J.Cell Sci. 118 ページ: 2363-2370
• [雑誌論文] Clinical significance of heparin-binding EGF (epidermal growth factor)-like growth factor and ADAM (a disintegrin and metalloprotease) 17 expression in human ovarian cancer. (2005)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, T., Miyamoto, S., Suzuki, S.O., Oki, E., Yagi, H., Sonoda, K., Yamazaki, A., Mizushima, H., Maehara, Y., Mekada, E., Nakano, H.
  • 雑誌名: Clin.Cancer Res. 11 ページ: 4783-4792
• [雑誌論文] Soluble form of heparin-binding EGF-like growth factor contributes to retinoic acid-induced epidermal hyperplasia. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kinmura, R., Iwamoto, R., Mekada, E.
  • 雑誌名: Cell Struct.Funct. 30 ページ: 35-42