研究課題
癌抑制に関与するクロマチン構造変換の分子機構を明らかにするため、本年度は、PML核ボディとクロマチンとの直接的な相互作用におけるDRIL1の役割について重点的に解析をおこない、DRIL1のp53の転写制御機構における役割を検討した。(1)DRIL1とPML核ボディの機能的相互作用の生化学的分子機序を明らかにするため、in vivo,in vitroにおける蛋白質間相互作用を免疫沈降・ウェスタンブロット法にて解析した。その結果、DRIL1とPMLタンパク質が直接結合することを明らかにし、さらに両タンパク質の相互作用に重要な領域をほぼ同定した。(2)DRIL1およびPML核ボディの核内局在変化について共焦点レーザー顕微鏡を用いて解析した結果、DNA障害後、DRIL1およびPML核ボティの発現の変化および局在変化がおこることを見出した。(3)既にsiRNAを用いたDRIL1ノックダウン実験の結果、p53蛋白質の翻訳後修飾および転写機能が著しく抑制されることを明らかにしている。そこでより詳細に解析するため本年度は、導入効率の高いDRIL1に対するshRNAを発現するアデノウイルスベクターの作成を試みた。現在、DRIL1のノックダウンにより、p53のアポトーシス誘導能が抑制されるかどうかの検討をおこなっている。(4)上記アデノウイルスベクターの作成が予想以上に困難を極めたため、当初おこなう予定であった、DRIL1をノックダウンした細胞を用いた実験、すなわちp53標的遺伝子のプロモーターとp53との相互作用およびクロマチン構造変換におけるDRIL1の役割の解析は、来年度おこなうことになった。
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Virchows Arch. (in press)
Oncogene 25
ページ: 1216-1224
