siRNAによって生じるインターフェロン反応の系統および、網羅的解析研究

2004 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16300151
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 宮岸 真 東京大学, 医学部附属病院, 特任助教授 (30323538)
• キーワード: ジーンディスカバリー / アポトシス / RNA干渉 / RNAiライブラリー

研究概要

RNAiは非常に効果的な遺伝子抑制法であり、簡便で、効果の高い遺伝子機能の解析法として、注目を集めている。しかし、最近、siRNAによって、非特異的な抑制効果であるインターフェロン反応が励起されることが報告され、その詳細な解析が急務となっている。本研究課題では、先ず、ベクター系によって発現されるsiRNAによるインターフェロン反応について、解析を行った。最初に、19塩基対のヘアピンRNAを発現するsiRNA発現ベクターを用いて、インターフェロン反応を起こすか否かについての検討を行った。インターフェロン反応の指標としては、2',5'オリゴアデニレースシンセターゼ(OAS)の発現を用いた。ルシフェラーゼ遺伝子をターゲットとする10種類のsiRNA発現ベクターをそれぞれHeLaS3細胞に導入し、リアルタイムPCRにより、OASの発現量の定量を行ったところ、10種類のsiRNA発現ベクターを導入した細胞では、どれもsiRNAを発現していないネガティブコントロールを導入した細胞と同じレベルのOASの発現しか発現しておらず、我々の使用しているsiRNA発現システムでは、インターフェロン反応を誘起しないことが示唆された。
また、この実験と並行して行っている、siRNAライブラリーによる二本鎖RNAによるインターフェロン反応のパスウェイ解析に関しては、Caspase8を含む複数の遺伝子の関与が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Control of siRNA expression using the Cre-loxP recombination system. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kasim V., Miyagishi M., Taira K.
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. 32 ページ: e66
• [雑誌論文] The RNA helicase RIG-I has an essential function in double-stranded RNA-induced innate antiviral responses. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yoneyama, M., Kikuchi, M., Natsukawa, T., Shinobu, N., Imaizumi, T., Miyagishi, M., Taira, K., Akira, S., Fujita, T.
  • 雑誌名: Nature Immunol. 5 ページ: 730-737
• [雑誌論文] Effects on RNAi of the tight structure, sequence and position of the targeted region. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yoshinari, K., Miyagishi, M., Taira, K.
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res. 32 ページ: 691-699
• [雑誌論文] Generation of shRNAi expression library against the whole human transcripts. (2004)
  • 著者名/発表者名: Miyagishi, M., Matsumoto, S., Taira, K.
  • 雑誌名: Virus Res. 102 ページ: 117-124
• [雑誌論文] Optimization of an siRNA-expression system with an improved hairpin and its significant suppressive effects in mammalian cells. (2004)
  • 著者名/発表者名: Miyagishi, M., Sumimoto, H., Miyoshi, H., Kawakami Y., Taira, K.
  • 雑誌名: Journal of Gene Medicine 6 ページ: 715-723