|
1)早期記憶学習障害を示す老化促進マウスSAM P8系と正常形質を示す日本産野生マウス由来JF1系を交配しF2雑種を得、5ヶ月齢に達した時点でSTEP THROUGH記憶学習実験を行い、120ヵ所以上の遺伝子多型マーカを用いて全ゲノム的QTL解析を行い、4以上のLOD SCOREを示しSAM P8に由来する3カ所の責任遺伝子座を第1番染色体、第12番染色体、第13番染色体上に同定した。非常に興味在ることに、正常な表現型を示すJF1マウスにも第15番染色体上に早期記憶学習障害を促進する遺伝子座が存在することを見いだした。
2)スピードコンジェニックマウス作製法を用いてSAM P8とJF1間のF1雑種マウスをJF1系統に対して7回戻し交配を繰り返しJF1の背景に候補遺伝子領域が存在する第1番、第12番、第13番あるいは第15番染色体をSAM P8に置換したコンジェニック系統を樹立した。
3)これらの候補領域に存在する遺伝子の内、脳で発現している遺伝子を中心に系統的な構造解析を進め、1番染色体からは3個、13番染色体からは1個の遺伝子、15番染色体からは2個のSAM系統に特異的なアミノ酸置換をもたらす1塩基多型を見いだした。
4)これらのアミノ酸置換をもたらすSNPを有する候補遺伝子の機能解析を行うため、各遺伝子をコードするcDNAを単離し、発現ベクターへ組み込み、培養細胞での発現系を確立した。
|
