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2005 年度 研究成果報告書概要

バキュロウイルスディスプレイによる膜タンパク質複合体解析

研究課題

研究課題/領域番号 16310147
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 生物分子科学
研究機関東京大学

研究代表者

浜窪 隆雄  東京大学, 先端科学技術研究センター, 教授 (90198797)

研究分担者 先浜 俊子  東京大学, 先端科学技術研究センター, 科学技術振興特任教員(特任助教授) (70187061)
増田 一之  東京大学, 先端科学技術研究センター, 科学技術振興特任教員(特任助手) (20345151)
研究期間 (年度) 2004 – 2005
キーワードバキュロウイルス / 膜タンパク質 / GPCR / γセクレターゼ / 脂質ラフト / ニカストリン / ペプチドトランスポーター / FRET
研究概要

発芽型バキュロウイルス(BV)に発現した膜タンパク質は、GPCR(BLT1,CCR2,CCR5,edg1,AT1a, AT2,D1,D5),GPCR複合体(ドパミン受容体-3量体Gタンパク質-アデニレートシクラーゼ)、γセクレターゼ複合体(プレセニリン、ニカストリン、APH1,PEN2)、ペプチドトランスポーター(PepT1)である。BLT1-BVでは、リガンドのLTB4を蛍光標識することによりBVでの結合アッセイを開発し、ドパミン受容体複合体では、BV上でリガンド依存性のシグナルが計測され、再構成できることが示された。γセクレターゼはBV上で活性型プレセニリンが再構成され、上記4種の膜タンパク質がC99からβアミロイドの生成に必要十分であることが示された。これらのBVをウイルスエンベロープタンパク質gp64トランスジェニックマウスに免疫することにより、CCR2,CCR5,edg1,ニカストリン、PepT1に対する特異モノクローナル抗体が作製でき、また機能を阻害する抗体や癌細胞に対してADCC活性を有する機能性抗体が得られるととがわかった。得られたニカストリン抗体は、未変性のニカストリンのN端を認識し、γセクレターゼ複合体がコレステロールラフトに活性型としてコレステロール依存性に分布すること、ラフト移行にはゲラニルゲラニル化が重要であること、またニカストリンが構造的にγセクレターゼ複合体の端に位置していることなどが示された。膜貫通領域での加水分解の機構を説明するモデルを示唆するものである。またGi-CFPとRGS10-YFPをリンカーでつなぐことにより、A1F刺激によりFRETを起こすプローブの作製に成功した。これらの結果は、BV上での膜タンパク質の発現系が膜タンパク質複合体解析に有用であることを示すものであると考えられた。

  • 研究成果

    (24件)

すべて 2006 2005 2004

すべて 雑誌論文 (24件)

  • [雑誌論文] Three-dimensional structure of the gamma-secretase complex.2006

    • 著者名/発表者名
      OguraT., MioK., HayashiI., MiyashitaH., KopanR., KodamaT., Hamakubo T., Iwastubo T., Tomita T., Sato C.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun. May5:343(2)

      ページ: 525-534

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] A simple hybridoma screening method for high-affinity monoclonal antibodies using the signal ratio obtained from time-resolved fluorescence assay.2006

    • 著者名/発表者名
      Daigo K, Sugita S, Mochizuki Y, Iwanari H, Hiraishi K, MiyanoK, Kodama T, Hamakubo T.
    • 雑誌名

      Anal Biochem. Apr15;351(2)

      ページ: 219-228

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Dysregulated expression of P1 and P2 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4alpha in the pathogenesis of human cancer.2006

    • 著者名/発表者名
      TanakaT., JiangS., HottaH., TakanoK., IwanariH., SumiK., DaigoK., OhashiR., SugaiM., MidorikawaY., HippoY., WatanabeA., UchiyamaY., HasegawaG., ReidP., AburataniH., IkegameC., UmezuH., HirayamaY., HamakuboT., SakaiJ., NaitoM., KodamaT.
    • 雑誌名

      J Pathol. Apr;208(5)

      ページ: 662-672

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Three-dimensional structure of the gamma-secretase complex.2006

    • 著者名/発表者名
      Ogura T, Mio K, Hayashi I, Miyashita H, Fukuda R, Kopan R, Kodama T, Hamakubo T, Iwastubo T, Tomita T, Sato C.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun. May 5;343(2)

      ページ: 525-534

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] A simple hybridoma screening method for high-affinity monoclonal antibodies using the signal ratio obtained from time-resolved fluorescence assay.2006

    • 著者名/発表者名
      Daigo K, Sugita S, Mochizuki Y, Iwanari H, Hiraishi K, Miyano K, Kodama T, Hamakubo T.
    • 雑誌名

      Anal Biochem. Apr 15;351(2)

      ページ: 219-228

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Dysregulated expression of P1 and P2 promoter-driven hepatocyte nuclear factor-4alpha in the pathogenesis of human cancer.2006

    • 著者名/発表者名
      Tanaka T, Jiang S, Hotta H, Takano K, Iwanari H, Sumi K, Daigo K, Ohashi R, Sugai M, Ikegame C, Umezu H, Hirayama Y, Midorikawa Y, Hippo Y, Watanabe A, Uchiyama Y, Hasegawa G, Reid P, Aburatani H, Hamakubo T, Sakai J, Naito M, Kodama T
    • 雑誌名

      J Pathol. Apr; 208(5)

      ページ: 662-672

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Recovery of functional peptide transporter PepT1 in budded baculovirus fraction.2005

    • 著者名/発表者名
      Saitoh R, Ohtomo T, Ito Y, Nezu J, Kimura N, Funahashi S, Aso Y, Ohizumi I, Kodama T, Hamakubo T, Tsuchiya M.
    • 雑誌名

      Protein Expr Purif. September26

      ページ: 130-135

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Histone methyltransferases G9a and GLP form heteromeric complexex and are both crucial for methylation of euchromatin at He-K9.2005

    • 著者名/発表者名
      Tachibana M, Ueda J, Fukuda M, TakedaN, OhtaT, IwanariH, Sakihama T, Kodama T, Hamakubo T.
    • 雑誌名

      Genes Dev. Apr 1;19(7)

      ページ: 815-826

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Association of active gamma-secretase complex with lipid rafts.2005

    • 著者名/発表者名
      UranoY, Hayashi I, Isoo N, Reid PC, Shibasaki Y, Noguchi N, Tomita T, IwatsuboT, HamakuboT, Kodama T.
    • 雑誌名

      J Lipid Res. May46(5)

      ページ: 904-912

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Expression of the LXR{alpha} Protein in Human Atherosclerotic Lesions2005

    • 著者名/発表者名
      Watanabe Y, Jiang S, Takabe W, Ohashi R, Tanaka T, Uchiyama Y, Katsumi K, Iwanari H, Noguchi N, Naito M, Hamakubo T, Kodama T
    • 雑誌名

      Arterioscler Thromb Vasc Biol. Mar;25(3)

      ページ: 622-627

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Vascular endothelial growth factor- and thrombin-induced termination factor, down syndrome critical region-1, attenuates endothelial cell proliferation and angiogenesis.2005

    • 著者名/発表者名
      MinamiT, HoriuchiK, MiuraM, AbidMR, TakabeW, NoguchiN, KohroT, GeX, AburataniH, HamakuboT, KodamaT, Aird WC.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. Nov26;279(48)

      ページ: 50537-50554

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Recovery of functional peptide transporter PepT1 in budded baculovirus fraction.2005

    • 著者名/発表者名
      Saitoh R, Ohtomo T, Ito Y, Nezu J, Kimura N, Funahashi S, Aso Y, Ohizumi I, Kodama T, Hamakubo T, Tsuchiya M.
    • 雑誌名

      Protein Expr Purif. September;46(1)

      ページ: 130-135

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Histone methyltransferases G9a and GLP form heteromeric complexes and are both crucial for methylation of euchromatin at H3-K9.2005

    • 著者名/発表者名
      Tachibana M, Ueda J, Fukuda M, Takeda N, Ohta T, Iwanari H, Sakihama T, Kodama T, Hamakubo T, Shinkai Y.
    • 雑誌名

      Genes Dev. Apr 1;19(7)

      ページ: 815-826

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Association of active gamma -secretase complex with lipid rafts.2005

    • 著者名/発表者名
      Urano Y, Hayashi I, Isoo N, Reid PC, Shibasaki Y, Noguchi N, Tomita T, Iwatsubo T, Hamakubo T, Kodama T.
    • 雑誌名

      J Lipid Res. May; 46(5)

      ページ: 904-912

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Expression of the LXR{alpha} Protein in Human Atherosclerotic Lesions.2005

    • 著者名/発表者名
      Watanabe Y, Jiang S, Takabe W, Ohashi R, Tanaka T, Uchiyama Y, Katsumi K, Iwanari H, Noguchi N, Naito M, Hamakubo T, Kodama T.
    • 雑誌名

      Arterioscler Thromb Vasc Biol. Mar;25(3)

      ページ: 622-627

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Vascular endothelial growth factor- and thrombin-induced termination factor, down syndrome critical region-1, attenuates endothelial cell proliferation and angiogenesis.2005

    • 著者名/発表者名
      Minami T, Horiuchi K, Miura M, Abid MR, Takabe W, Noguchi N, Kohro T, Ge X, Aburatani H, Hamakubo T, Kodama T, Aird WC.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. Nov 26;279(48)

      ページ: 50537-50554

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Selective reconstitution and recovery of functional gamma-secretase complex on budded baculovirus particles.2005

    • 著者名/発表者名
      Ikuo Hayashi, Yasuomi Urano, Rie Fukuda, Nariko Isoo, Tatsuhiko Kodama, Takao Hamakubo, Taisuke Tomita, Takeshi Iwatsubo
    • 雑誌名

      J Biol Chem. Sep 3;279(36)

      ページ: 38040-38046

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Selective reconstitution and recovery of functional gamma-secretase complex on budded baculovirus particles.2004

    • 著者名/発表者名
      Hayashi I, Urano Y, Fukuda R, Isoo N, Kodama T, Hamakubo T, Tomita T, Iwatsubo T.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. Sep3;279(36)

      ページ: 38040-38046

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] A Comparison of Differences in the Gene Expression Profiles of Phorbol 12-myristate 13-acetate Differentiated THP-1 Cells and Human Monocyte-derived Macrophage.2004

    • 著者名/発表者名
      Kohro T, Tanaka T, Murakami T, Wada Y, Aburatani H, Hamakubo T, Kodama T
    • 雑誌名

      J Atheroscler Thromb. 11(2)

      ページ: 88-97

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Identification of soluble NH2-terminal fragment of glypican-3 as a serological marker for early-stage hepatocellular carcinoma.2004

    • 著者名/発表者名
      HippoY, WatanabeK, WatanabeA, MidorikawaY, Yamamoto, IharaS, TokitaS, IwanariH, ItoY, NakanoK, NezuJ, TsunodaH, YoshinoT, OhizumiI, TsuchiyaM, OhnishiS, MakuuchiM, HamakuboT, KodamaT, Aburatani H.
    • 雑誌名

      Cancer Res. Apr 1;64(7)

      ページ: 2418-2423

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Interaction between Hex and GATA Transcription Factors in Vascular Endothelial Cells Inhibits flk-1/KDR-mediated Vascular Endothelial Growth Factor Signaling.2004

    • 著者名/発表者名
      Minami T, MurakamiT, Horiuchi K, Miura M, Noguchi T, Miyazaki J, Hamakubo T, Aird WC, Kodama T.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. May14;279(20)

      ページ: 20626-20635

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] A Comparison of Differences in the Gene Expression Profiles of Phorbol 12-myristate 13-acetate Differentiated THP-1 Cells and Human Monocyte-derived Macrophage.2004

    • 著者名/発表者名
      Kohro T, Tanaka T, Murakami T, Wada Y, Aburatani H, Hamakubo T, Kodama T.
    • 雑誌名

      J Atheroscler Thromb. 11(2)

      ページ: 88-97

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Identification of soluble NH2-terminal fragment of glypican-3 as a serological marker for early-stage hepatocellular carcinoma.2004

    • 著者名/発表者名
      Hippo Y, Watanabe K, Watanabe A, Midorikawa Y, Yamamoto S, Ihara S, Tokita S, Iwanari H, Ito Y, Nakano K, Nezu J, Tsunoda H, Yoshino T, Ohizumi I, Tsuchiya M, Ohnishi S, Makuuchi M, Hamakubo T, Kodama T, Aburatani H.
    • 雑誌名

      Cancer Res. Apr 1;64(7)

      ページ: 2418-2423

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Interaction between Hex and GATA Transcription Factors in Vascular Endothelial Cells Inhibits flk-1/KDR-mediated Vascular Endothelial Growth Factor Signaling.2004

    • 著者名/発表者名
      Minami T, Murakami T, Horiuchi K, Miura M, Noguchi T, Miyazaki J, Hamakubo T, Aird WC, Kodama T.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. May 14;279(20)

      ページ: 20626-20635

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より

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公開日: 2007-12-13  

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