| 研究概要 |
1.無細胞タンパク質合成系の改良
5種類の大腸菌シャペロン(GroEL, GroES, DnaK, DnaJ, GrpE)を高発現する大腸菌から調製した抽出液を用いて転写・翻訳共役反応を行うことにより、通常の抽出液では活性がでない数種類の酵素が活性型で得られることがわかっている。今回、シャペロンの誘導条件を検討することで、更に効率よく活性型タンパク質を得られる抽出液を取得できた。
2.酵素の進化分子工学的改変
・キシロース資化関連酵素として、新たにカビ由来XI(キシロースイソメラーゼ)と高度高熱菌Thermus由来XI遺伝子を取得した。両XI共、上記改良型無細胞系で活性型の酵素が得られた。そのうち、酵母菌体内での活性が高いとされるカビ由来XIの反応効率向上を目的に、ランダム変異ライブラリーを作製した。SIMPLEX法によるスクリーニングを行った結果、陽性候補ウェルが認められた。現在、変異体のクローン化と評価を実施中である。
・酵母由来のXK(キシルロキナーゼ)遺伝子を取得し、乳酸デヒドロゲナーゼ遺伝子を導入した乳酸生産酵母の染色体へ導入した。今後、更に野生型XI及び改変したXIを導入し、キシロースからの乳酸生産能を比較検討する。
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